رات المبرمج محفز ، AIF إليسا كيت

رات المبرمج محفز ، AIF إليسا كيت

مبدأ الكشف س

إليسا ( مزدوجة ساندويتش الضد ELISA）。 قبل حزمة رات المبرمج عامل تحفيز ( AIF )microporous انزيم المسمى لوحة تحتوي على الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ( الأجسام المضادة الصلبة ) . رات المبرمج عامل تحفيز ( AIF ) معايرة عينة لفحصها ، ثم إضافة آخر HRP المسمى المضادة رات المبرمج عامل تحفيز ( AIF ) ( انزيم المسمى الأجسام المضادة ) ، بعد أن تم تربيتها في درجة حرارة كافية وغسلها ، غير ملزمة المكونات إزالتها . - مجمعات ساندويتش مستضد - انزيم المسمى الأجسام المضادة . في إطار العمل من إنهاء الحل ( 2M حامض الكبريتيك ) ، وأخيرا تحويلها إلى اللون الأصفر ، الامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) يتحدد في 450nm الطول الموجي من انزيم أداة رسم الخرائط ، الامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) يرتبط مع محتوى الماء في العينة التي سيتم الكشف عنها . رات المبرمج عامل تحفيز ( AIF )هناك علاقة طردية بين تركيز . تركيب منحنى المعايرة ، يمكن حساب عينة رات ( AIF )التركيز .

المعدات والكواشف اللازمة

و انزيم أداة وسم ( الطول الموجي 450nm فلتر )

و37 درجة مئوية ترموستاتي ( لا ينصح باستخدام خلية حاضنة CO2 )

و التلقائي آلة الغسيل أو متعدد القنوات الماصة بالقطارة ( غسل يدوي )

و عقيم الجيش الشعبي أنبوب شفط المتاح

و قناة واحدة دقيقة ( 0.5-10 ميكرولتر ، 5-50 ميكرولتر ، 20-200 ميكرولتر ، 200-1000 ميكرولتر ) متعدد القنوات ( ماصة ماصة معايرة قبل الاستخدام ) .

وامتصاص الماء ورقة عينة اضافة فتحة

ومنزوع الأيونات الماء أو الماء المقطر

تكوين عدة :

جمع العينات س

1、أنبوب اختبار جمع الدم يجب أن تكون خالية من الحرارة و الذيفان الداخلي .

2、 البلازما المضادة للتخثر EDTA 。 تجنب استخدام عينات الدم ، فرط شحوم .

3、العينة يجب أن تكون واضحة وشفافة ، تعليق يجب إزالتها بالطرد المركزي .

4、 إذا كان لا يمكن الكشف عنها في الوقت المناسب بعد جمع العينات ، يرجى إعادة تعبئتها مرة واحدة تجنب تكرار التجميد والذوبان ، والكشف في غضون 3-6 أشهر .

5、 إذا كان تركيز العينة الخاصة بك هو أعلى من الحد الأقصى ، يرجى الرجوع إلى الحالة الفعلية . جعل مناسبة متعددة تمييع ( من المستحسن أن تفعل قبل التجربة لتحديد تخفيف متعددة ) .

ظروف التخزين :

جمع العينات وحفظهاس

و وضع عينة الدم كله في درجة حرارة الغرفة 2 ساعة أو 2-8 درجة مئوية بين عشية وضحاها . 1000 * ز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة ، وإزالة . يمكن الكشف عنها على الفور ، أو استخدام مرة واحدة في التعبئة والتغليف والتخزين المجمد - 20 درجة مئوية أو - 80 درجة مئوية .

و البلازما المضادة للتخثر EDTA-Na2/K2， العينات التي تم جمعها في غضون 30 دقيقة في 2-8 درجة مئوية ، 1000 × ز الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة . يمكن الكشف عنها على الفور ، أو تخزينها في - 20 درجة مئوية أو - 80 درجة مئوية في تهمة واحدة . يرجى الرجوع إلى دليل إعداد العينات عند استخدام أو اختيار مضادات التخثر الأخرى .

وعينات الأنسجة عادة ما تكون مصنوعة من خليط من الأنسجة .
3-1 وضع الأنسجة المستهدفة على الجليد مع precooling برنامج تلفزيوني عازلة ( 0.01m ، الرقم الهيدروجيني = 7-4 ) يغسل لإزالة بقايا الدم ، وزنها احتياطية .

3-2 طحن خليط من الأنسجة على الجليد مع تكسير السائل . حجم التكسير يعتمد على وزن الأنسجة . 1G شظايا الأنسجة باستخدام 9ml ليزات . وبالإضافة إلى ذلك ، مثبطات الأنزيم البروتيني ، مثل 1mm pmsf ، واقترح أن تضاف إلى الانحلال الحراري الحل .

3-3 بالموجات فوق الصوتية يمكن استخدامها لكسر أو تكرار التجميد تحسن لمزيد من العلاج في عملية كسر بالموجات فوق الصوتية ، حمام الثلج يجب أن تكون باردة ؛ تكرار التجميد تحسن الأسلوب يمكن أن تتكرر مرتين .

3-4 إعداد خليط السائل 5000 * ز الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، وترك واضحة . أو حسب الكمية المستخدمة في التعبئة والتغليف والتخزين المجمد - 20 درجة مئوية أو - 80 درجة مئوية .

3-5 وفقا لمتطلبات التجربة ، مجموع تركيز البروتين من أجل تسهيل تحليل البيانات ، BCA الأسلوب الموصى به . تركيز البروتين الكلي المعدل إلى 1-3 مغ / مل كان يستخدم للكشف عن إليسا . بعض عينات الأنسجة ، مثل الكبد والكلى والبنكرياس ، تتفاعل مع الركيزة اللونية في تركيزات عالية من البيروكسيديز الذاتية ، مما يؤدي إلى نتائج إيجابية كاذبة . 1 ٪ H2O2 المعطل لمدة 15 دقيقة .

ملاحظة تكسير السائل برنامج تلفزيوني عازلة أو متوسطة القوة ريبا تكسير السائل . عندما يستخدم نموذج المنفعة ، قيمة الرقم الهيدروجيني يجب تعديلها إلى الرقم الهيدروجيني 7-3 . المكونات التي تحتوي على np-40 تريتون x-100 , و DTT يمكن تجنبها . 50mm تريس + 0.9 ٪ كلوريد الصوديوم + 0.1 ٪ الحزب الديمقراطي الصربي ، الرقم الهيدروجيني 7-3 الموصى بها .

و جمع طاف من خلية ثقافة طاف ، 2-8 ° C ، 2500rpm الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، وجمع طاف من خلية ثقافة واضحة . تستخدم على الفور في الاختبار ، أو استخدام مرة واحدة في - 80 ° C التجمد الاحتياطي .

وخلية ليزات

5-1 جمع وتفكيك الخلايا العالقة : 2-8 درجة مئوية ، 2500rpm الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، وجمع الخلايا . ثم يضاف ما قبل التبريد برنامج تلفزيوني برفق مختلطة جيدا لتنظيف ، 2-8 درجة مئوية ، 2500rpm الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، وجمع الخلايا . إضافة 0.5-1ml خلية ليزات و كمية مناسبة من مثبطات الأنزيم البروتيني ( على سبيل المثال ، pmsf ، 1 ملمول / لتر ) ووضعها على الجليد لمدة 30 دقيقة إلى 1 ساعة ، أو كسر بالموجات فوق الصوتية .

5-2 جمع و تقسيم الخلايا الملتصقة : إزالة طاف وإضافة precooling برنامج تلفزيوني يغسل ثلاث مرات . إضافة 0.5-1 مل خلية ليزات و كمية مناسبة من مثبطات الأنزيم البروتيني ( على سبيل المثال ، pmsf ، 1 ملمول / لتر في تركيز العمل ) و كشط بلطف من الخلايا الملتصقة . تعليق خلية في أنبوب الطرد المركزي ، وضعت على الجليد ، تكسير لمدة 30 دقيقة - 1 ساعة ، أو كسر بالموجات فوق الصوتية .

5-3 في عملية انقسام الخلية ، أنبوب الطرد المركزي يمكن أن يكون في مهب أو متقطع يهز بواسطة بندقية الرأس ، مما يجعل البروتين تماما تقسيم . هذا هو الحمض النووي ، والتي يمكن أن تكون مكسورة بواسطة الموجات فوق الصوتية . أو 3-5mm بالموجات فوق الصوتية التحقيق ، 150-300w السلطة ، الجليد بالموجات فوق الصوتية تجهيز العينات ، 1-2 ثانية ، توقف 30 ثانية ، 3-5 دورات . و

5-4 الانتهاء من تكسير أو كسر بالموجات فوق الصوتية ، 2-8 ° C ، 10000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 10 دقائق ، طاف في الجيش الشعبي أنبوب ، على الفور ، أو وفقا لاستخدام مرة واحدة في - 80 ° C تجميد التخزين الاحتياطي .

رات المبرمج محفز ، AIF إليسا كيت

ملاحظةملاحظة مع عينة من المنظمة .

ملاحظة : أعلاه للرجوع اليها فقط ! نأمل أن المعلومات المذكورة أعلاه يمكن أن تساعدك على جعل الحق في الاختيار !