مثل جهاز الثقافة كيت ( سرطان الكبد ، سرطان القولون ، سرطان الكلى )

طريقة الاستخدام

الجيل الأول
( 1 ) يجب أن توضع الأنسجة بعد أخذ العينات في قارورة عينات من الأنسجة المبردة ( 2-8 ° C ) تخزين السائل ه ، ونقلها بسرعة إلى مختبر نظيف لتجهيز الأنسجة وفصل الخلايا ، والتقاط الصور وتسجيل المعلومات .
( 2 ) إعداد عدد من أطباق بتري ، إضافة 4 ℃ precooling الثقافة الابتدائية العازلة ب الاستعداد .
( 3 ) أخذ العينات زجاجة تعقيم ، وضع الأنسجة في طبق الثقافة ، واستخدام الثقافة الابتدائية العازلة ب ثلاث مرات بعد التنظيف ، واستخدام العيون أو جراحة داو جيان قطع الأنسجة إلى حجم حوالي 1-3 ملم3كتلة الأنسجة .
( 4 ) تم هضمها من قبل الأنسجة الأولية من سرطان الثدي ، يهضم يهز في 37 ℃ لمدة 10-20 دقيقة .
( 5 ) كمية صغيرة من السائل لوحظ تحت المجهر ، أكثر من خلية واحدة أو مجموعة من الخلايا أقل من 70um لوحظ تحت المجهر ، ثم ثلاثة أضعاف حجم الثقافة الابتدائية العازلة ب أضيفت إلى وقف الهضم .
( 6 ) الترشيح تتم عن طريق استخدام الشاشة مع حجم المسام 100um . بعد الترشيح هو جمعها ، طاف هو إزالتها بعد الطرد المركزي التخصيب في 300g لمدة 5 دقائق ، و الثقافة الابتدائية العازلة ب يضاف إلى تعليق الطرد المركزي مرة أخرى .
حساب مصفوفة الغراء : بعد الخطوة 6 لاحظ حجم الأنسجة التي تم جمعها ، إضافة 25 مرة حجم الأنسجة مصفوفة الغراء )أبس 9495تعليق الثقيلة بلاطة .
( 8 ) 24 - ثقب خلية ثقافة المجلس ، على سبيل المثال ، 25 ul نسيج مصفوفة الغراء الخليط في كل ثقب هو الاستغناء عن الرصف ( 4 ℃ ) .
( 9 ) وضع لوحة الثقافة في 37 ℃ حاضنة لمدة 10-15min لجعل الغراء ، إضافة إلى سرطان الثدي مثل الجهاز متوسطة الثقافة ( استعادة درجة حرارة الغرفة ) الثقافة .
2 ، مثل أجهزة الثقافة
( 1 ) ماصة بندقية تمتص الثقافة المتوسطة ، إضافة 1-2ml 4 ℃ عازلة ز في كل حفرة لمدة 2 دقيقة .
( 2 ) ماصة تهب مصفوفة الغراء بلطف ، وجمع في 15ml أنبوب الطرد المركزي ، وترك في 4 ℃ لمدة 10 دقائق . ( كل 6-8 ثقوب في مجموعة واحدة )
( 3 ) أ : عدد أو حجم صغير من أجهزة الطرد المركزي : 5 دقائق إلى التخلي عن طاف ، إضافة كمية مناسبة من أجهزة مثل الثقافة المتوسطة ز إعادة تعليق في 1.5ml أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 300g لمدة 5 دقائق إلى التخلي عن السائل في الخطوة 4 .
ب : عندما يكون عدد كبير من الأجهزة أو حجم كبير ، طاف هو التخلص من الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، كمية مناسبة من الجهاز الهضمي مرور السائل د الهضم لمدة 2-3 دقائق ، العازلة ز من الجهاز الهضمي مرور الثقافة المضافة لوقف الهضم ، مختلطة السائل هو التخلص من الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، و كمية مناسبة من الجهاز الهضمي مرور السائل ز الثقافة المضافة إلى 1.5ml أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 300g لمدة 5 دقائق ، السائل هو التخلص من الخطوة 4 .
( 4 ) بعد جمع الأجهزة ، إضافة مصفوفة الغراء تعليق كل مسام 25ul مصفوفة الغراء وضعت في 24 مسام خلية ثقافة لوحة ، وضعت في حاضنة لمدة 10-15min ، إضافة 500ul حقوق سرطان الثدي مثل الجهاز متوسطة الثقافة .
3 - تجميد الجهاز
( 1 ) ماصة بندقية تمتص الثقافة المتوسطة ، إضافة 1-2ml 4 ℃ عازلة ز في كل حفرة لمدة 2 دقيقة .
( 2 ) ماصة تهب مصفوفة الغراء بلطف ، وجمع في 15ml أنبوب الطرد المركزي ، وترك في 4 ℃ لمدة 10 دقائق . ( كل 6-8 ثقوب في مجموعة واحدة )
( 3 ) إزالة طاف من الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، إضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة ز تعليق مرة أخرى ، 300 جرام الطرد المركزي لمدة 5 دقائق .
( 4 ) إضافة كمية مناسبة من تجميد الجهاز و ضربة بلطف تعليق الثقيلة ، مع 24 حفرة خلية ثقافة المجلس على سبيل المثال : كثافة 2 حفرة تجميد أنبوب واحد ، حجم كل أنبوب 1.4 مل .
( 5 ) القيام بعمل جيد في وضع العلامات من المعلومات ، بعد إجراء التبريد ، ونقل إلى النيتروجين السائل لفترة طويلة .
إنعاش الجهاز
( 1 ) الثقافة المتوسطة ز من 10 مل من نوع الجهاز في 15ml أنبوب الطرد المركزي .
( 2 ) تجميد خلايا الجهاز مثل مأخوذة من خزان النيتروجين السائل ، وذوبان بسرعة في حمام مائي في 37 ℃ . . . . . . .
( 3 ) أثناء ذوبان حمام الماء ، أنبوب التبريد يجب أن يهز برفق لضمان ذوبان الجليد في 1-2 دقيقة .
( 4 ) حل الجهاز مثل الخلايا بسرعة نقلها إلى 15ml أنبوب الطرد المركزي ، واستخدام ماصة بلطف ضربة 6-8 مرات ، 300g الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، ثم إزالة طاف وجمع الجهاز مثل الخلايا هطول الأمطار . إضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة ز تعليق في 1.5ml أنبوب الطرد المركزي الطرد المركزي 300g لمدة 5 دقائق .
( 5 ) مصفوفة الغراء علقت مرة أخرى ، كل ثقب 25ul مصفوفة الغراء وضعت في 24 خلية ثقافة المجلس ، وضعت في حاضنة لمدة 10-15min لتشكيل الغراء ، إضافة 500 ul الإنسان سرطان الثدي مثل الجهاز متوسطة الثقافة .