neuro2a ( N2A ) الخلايا العصبية في الدماغ الماوس

خلية مقدمة

استنساخنيورو-2Aمنآر جي كليبوإف. إتش. رادلسوتراAإنشاء autogenetic الورم في الفئران . هذه الخلايا تنتج كميات كبيرة من البروتينات التي تلعب دورا في انقباض أنيبيب استجابة محورية تدفق البلازما في الخلايا العصبية .

خصائص الخلية

( 1 )المصدر :العصبية في الدماغ

( 2 )علم التشكل المورفولوجياسالأميبي مثل الخلايا الجذعية

( 3 )المحتوى>1x10⁶ عدد الخلايا

( 4 )مواصفة :T25قارورةأو1 ملتجميد أنبوب التعبئة والتغليف

( 5 ) إستعمال :لأغراض البحث العلمي فقط .

النقل والتخزين :الثلج الجافالنقلالانتعاش والبقاء على قيد الحياةخليةس（1و1 ملالمجمدة تخزين الأنابيب التعبئة والتغليف لنقل الثلج الجاف ، بعد استلام-80درجة حرارة الثلاجة بين عشية وضحاها بعد تخزينها في النيتروجين السائل أو الانتعاش مباشرة ،إذا كان الثلج الجاف يتبخرتجميد تخزين الأنابيب غطاء زجاجة قطرة ،تلف وتلوث الخلايا ، يرجى الاتصال بنا على الفوراتصالم2وT25بقاء زجاجة الإنعاشخليةدرجة الحرارة العادية الشحن ،جمعبعد وصوله ، فإنه يعمل وفق طريقة المعالجة بعد تلقي الخلايا .

بعد تلقي الخلايامعالجة

1) بعد تلقي الخلايا ،5%تعقيم الكحول زجاجة الجدارT25زجاجة37حاضنة حوالي2-3hإذا كان لديك أي معلومات أخرى عن هذا الموضوع الرجاء إضافته مجانا .

2من فضلك4أو5Xتأكيد حالة الخلية تحت المجهر و التقاط الصور من الخلايا التي وردت للتو )10س20س ) كل2-3و صورة واحدة من ظهور ثقافة زجاجة ، والتي يمكن استخدامها كأساس للحصول على حالة الخلية بعد البيع .

3وخلية ملتصقة37يوضع في حاضنة2-3hنمو الخلايا الملتصقة لوحظ تحت المجهر ، وبعض الخلايا الملتصقة سوف تسقط من الاهتزاز في عملية النقل السريع و تصبح كتلة بعد السقوط . إذا كانت كثافة نمو الخلايا لوحظ تحت المجهر60%إذا كان هناك أي خلايا غير ملتصقة الجدران التي تحتاج إلى إعادة تدويرها بواسطة الطرد المركزي ، ثم تعليق في الثقافة الأصلية زجاجة يمكن إزالتها .,إضافة جديدة متوسطة الثقافة الخاصة6-8 ملالثقافة في خلية ثقافة مربع . كثافة نمو الخلايا70-80%أعلاه ، يمكن أن تحمل على مرور الخلية العلاج . إذا كانت الخلايا التي فقدت بسبب الاهتزاز النقل تحتاج إلى إعادة تدويرها بواسطة الطرد المركزي .

4وملاحظة : وسائل الإعلام المستخدمة في النقل لا يمكن استخدامها في زراعة الخلايا ، يرجى استبدال وسائل الإعلام الخاصة التي تم إعدادها حديثا وفقا لتعليمات خلية ثقافة الشرط . أول مرور بعد تلقي اقتراح الخليةT25زراعة زجاجة1س2نسل

واحد .الثقافة المتوسطةوزراعةتجميد التخزينشروط التحضير :

( 1 )استعدادميموسائل الإعلام ؛جودة عاليةمصل بقري جنيني10%نمقاومة مزدوجة1%منتدى

( 2 )حالة ثقافة: بخار المرحلة : الهواء ،95%ثاني أكسيد الكربون5%درجة الحرارة37℃，حاضنة الرطوبة70- 80%منتدى

( 3 )تجميد السائلس901%سيرومو10٪ DMSO，تستخدم حالياالآنالتزاوجمنتدى

ثانيا .خليةمعالجةس

( 1 )إنعاش الخلايا المجمدةص

سوف تحتوي على1 ملتجميد أنبوب تعليق خلية في37يهز بسرعة في حمام مائي و يذوب فيخاصأنبوب الطرد المركزي من الثقافة المتوسطة مختلطة بالتساوي . في1000RPMالطرد المركزي في حالة3-5 دقايقsupernatants مهجورة و تعليق الخلايا في وسائل الإعلام الخاصة . ثم تعليق خلية تضاف إلىخاصالثقافة المتوسطة في زجاجة أو طبق37درجة مئوية الثقافة بين عشية وضحاها . نمو الخلايا و كثافة الخلية لوحظ تحت المجهر في اليوم التالي .

( 2 )مرور الخليةإذاخليةكثافة80-90%，أييمكن القيام بهثقافة فرعيةمنتدى

يمكن الإشارة إلى الطرق التالية من أجل مرور الخلايا الملتصقة :

1. التخلي عن الذهابثقافة طاف ، مع عدم وجود الكالسيومأيون المغنيسيومالPBSترطيب الخلايا1-2وقت .منتدى

2. انضمام0.25فم / فالتربسين-0.53 ملم EDTAفيزراعة زجاجة( أ )T25قارورة1-2 ملوT75قارورة2-3 ملو，وضع37℃حاضنةالهضم1-2دقيقة( عسر الهضم الخلايا بشكل صحيح يمكن أن تطيل فترة الهضم )رانلاحظ تحت المجهرالهضم الخلويالحالةروومعظم الخلايا مدورةو تسقطالعودة إلى طاولة العمليات ، اضغط علىعدة مراتبعد زراعة زجاجةانضمام3-4 مليحتوي10%FBSمتوسطة الثقافةإنهاءهضممنتدى

3.خفقت بلطف ثم امتصفي1000RPMمادةالطرد المركزي تحت قطعة3-5 دقايق، التخلص من طاف ، إضافة1-2 ملالثقافة المتوسطة ثم تهب بالتساوي .تعليق خلية1س2نسبة جديدةT25إضافة زجاجة6-8 ملثقافة جديدة متوسطة حسب تعليمات للحفاظ على نمو الخلايا وحيويتها .1 : 2-1 : 5نسبةمنتدى

3تجميد الخليةسبعد تلقي المشورة من الخلايا قبل الثقافة3مجموعة من بذور الخلايا المجمدة لاستخدامها في التجارب اللاحقة . تحتT25زجاجة على سبيل المثال ;

1. خليةتجميد الوقتحسبعملية مرور الخلية جمع الخلايا المهضومة في أنبوب الطرد المركزي ، يمكن استخدام خلايا الدم لوحة العد العد لتحديد كثافة الخلايا المجمدة . أوصت بالتبريد كثافة الخلية العامة1س10⁶سس10⁷الخلايا الحية/ مl.

2. 1000 دورة في الدقيقةطرد مركزي3-5 دقايقإزالة طاف . . . . . . . تعليق الخلايا مع إعداد الخلايا المجمدة1 ملتجميد تخزين السائل1س10⁶سس10⁷الخلايا الحية/ ملتعيين خلية في cryopreservoir مع اسم ، جبر ، تاريخ ، الخ .

3. الحفاظ على الخلايا المجمدة في برنامج التبريد مربع ،-80ثم يتم نقلها إلى النيتروجين السائل الحاويات لتخزين . وفي الوقت نفسه ، فإن الموقف من تجميد تخزين الأنابيب في النيتروجين السائل حاوية يتم تسجيلها من أجل متابعة التفتيش والاستخدام .

ملاحظة :

1. جميع الخلايا الحيوانية تعتبر يحتمل أن تكون خطرة بيولوجيا ، ويجب أن تعمل في المرحلة الثانية من السلامة البيولوجية ، يرجى ملاحظة أن جميع النفايات السائلة والأواني التي تأتي في اتصال مع هذه الخلايا يجب أن تكون معقمة قبل التخلص منها .

2. من المستحسن دائما استخدام القفازات الواقية ، والملابس الواقية والأقنعة الواقية عند استعادة الخلايا المجمدة . ملاحظة : تجميد الأنابيب المغمورة في النيتروجين السائل سوف تتسرب ، وسوف ببطء ملء النيتروجين السائل . عندما يذوب النيتروجين السائل في مرحلة الغاز يمكن أن يؤدي إلى انفجار السفينة أو ضربة قبالة غطاء مع قوة خطيرة ، مما أدى إلى ارتفاع الحطام ، مما تسبب في أضرار بشرية .