رابطة الدول المستقلة خط a2780 / DDP لسرطان المبيض

اسم الخلية :رابطة الدول المستقلة بو خط المخدرات لسرطان المبيضA2780/DDP　

رقم الشحن :ws156 ( a2780 شارع الهوية )

مواصفة :1 × 10 خلايا / T25 قارورة

الاستخدام : لأغراض البحث العلمي فقط

مقدمة الخلية

الخليةالمخدرات مقاومة خط الخلية التي شيدت من قبل a2780 الخلايا .

خصائص الخلية

1 ) المصدر : سرطان المبيض

2 ) التشكل : epithelioid ، لصق الجدار النمو

3 ) المحتوى : > 1x106 عدد الخلايا

4 ) المواصفات : T25 زجاجة أو 1ml حزمة أنبوب التخزين المجمد

5 ) إستعمال : فقط لأنّ بحث إستعمال .

إعداد الثقافة المتوسطة و ظروف التخزين المجمد

( 1 )انظر تعليمات مفصلة .

المصل نوصي FBS500-WP-002

2 ) الثقافة شرط : بخار المرحلة : الهواء ، 95 ٪ ؛ ثاني أكسيد الكربون درجة الحرارة : 37 درجة مئوية ، حاضنة الرطوبة 70 ٪ - 80 ٪ .

3 ) التخزين المجمد السائل : 90 ٪ مصل الدم ، 10 ٪ دمسو ، وتستخدم الآن على استعداد .

رابعاالعلاج بالخلايا

1 ) إنعاش الخلايا المجمدة

سوف تحتوي علىتجميد تخزين أنبوب 1 مل خلية تعليق يهز بسرعة وذوبان في 37 ℃ حمام الماء ، ثم تضاف إلى أنبوب الطرد المركزي تحتوي على 4-6 مل متوسطة الثقافة ، مختلطة بالتساوي . في 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 3-5 دقائق ، supernatants كانت مهجورة و الخلايا المتوسطة كانت معلقة مرة أخرى . تعليق خلية ثم أضيفت إلى قارورة تحتوي على 6-8ml متوسطة الثقافة ( أو طبق ) لمدة ليلة في 37 ℃ . . . . . . . نمو الخلايا و كثافة الخلية لوحظ تحت المجهر في اليوم التالي .

2 ) مرور الخلية : إذا كانت كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور الثقافة .

الطرق التالية يمكن أن تستخدم في نشر خلايا ملتصقة

1 - إزالة طاف ، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بدون أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم 1-2 مرات .

2 - إضافة 0.25 في المائة ( ث / ت ) pancreaticase-0.53 ملم EDTA في قارورة ( T25 1-2 مل ، T75 2-3 مل ) في 37 ℃ لمدة 1-2 دقيقة ( عسر الهضم الخلايا يمكن أن تطيل فترة الهضم بشكل صحيح ) ، ثم لاحظ تحت المجهر ، إذا كان جزء كبير من خلايا مستدير و تقشير قبالة ، بسرعة العودة إلى طاولة العمليات ، وضرب عدة مرات في قارورة ، إضافة 3-4 مل تحتوي على 10 ٪ FBS الهضم المتوسطة .

3 - ضخ بلطف ، الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 3-5 دقائق ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2 مل متوسطة الثقافة ثم تهب بالتساوي . تعليق خلية تم تقسيمها إلى 2 : 1 زجاجة T25 ، 6-8 مل من وسائل الإعلام الجديدة أضيفت إلى الحفاظ على نمو الخلايا .

ملاحظة : مرور الخليةبعد 1 ~ 2 مرات ، يمكن أن تستمر في الانتشار ، يمكن أن تزيد من تركيز الدواء إلى 0.5ug / ml لمواصلة الثقافة . في هذه العملية ، إذا كانت الخلية توقف عن الانتشار و في حالة سيئة ، ثم تركيز الدواء ( نصف تركيز الدواء ) ينبغي تخفيض أو متوسطة الثقافة التي لا تحتوي على المخدرات ينبغي أن تستخدم ، حتى كثافة الخلية حوالي 8 × 105 / مل ، و حالة نمو جيدة ، ثم تركيز الدواء المطلوب يمكن استبدالها .

cryopreserved الخلايا : بعد تلقي الخلايا ، فمن المستحسن أن cryopreserved دفعة من بذور الخلايا في أول 3 أجيال من الثقافة لاستخدامها في التجارب اللاحقة .

أدناهT25 زجاجة على سبيل المثال ؛

1 . عندما يتم تجميد الخلايا ، خلايا الجهاز الهضمي يتم جمعها في أنبوب الطرد المركزي وفقا لعملية مرور الخلايا ، خلايا الدم عد لوحة يمكن استخدامها لتحديد كثافة الخلايا المجمدة . أوصت بالتبريد كثافة الخلايا العادية 1 × 106 ~ 1 × 107 الخلايا الحية / مل .

1000rpm الطرد المركزي 3-5min ، وإزالة طاف . الخلايا التي تم إعادة تعليق من قبل خلية واحدة cryopreserved الحل ، كل 1 مل من cryopreserved الحل يحتوي على 1 × 106 ~ 1 × 107 الخلايا الحية / مل في cryopreserved أنبوب .

ملاحظة : لا يمكن إضافة الأدوية أثناء التجميد .

2 - تجميد الخلايا المخزنة في برنامج التبريد مربع ، الثلاجة - 80 درجة بين عشية وضحاها ، ثم نقلها إلى النيتروجين السائل الحاويات للتخزين . وفي الوقت نفسه ، فإن الموقف من تجميد تخزين الأنابيب في النيتروجين السائل حاوية يتم تسجيلها من أجل متابعة التفتيش والاستخدام .

رابطة الدول المستقلة خط a2780 / DDP لسرطان المبيض