Hepa1-6； الماوس خلايا السرطان

واحد Hepa1-6； الماوس خلايا السرطانحالة ثقافة

ثانياHepa1-6； الماوس خلايا السرطانبعد تلقي العلاج

طرق علاج الخلايا الإنعاش :أفضل طريقة لنقل الخلايا هو ملء الثقافة المتوسطة و ختم زجاجة الفم بعد الثقافة في حالة جيدة . الحصول على الخلايا75% كحول يرشّ كلّيّاخليةقارورة，العقيم بدقةبعد .وضع زجاجة خلية في حاضنة2-4 ساعات لتحقيق الاستقرار في حالة الخليةمنتدىبعد الوقوفلاحظ نمو الخلايا تحت المجهر ، ثم أخذ صور متعددة من الخلايا والحفاظ عليها )أفضل .40x ، 100x ، 200x لكل قطعة )，صور قبل ثلاثة أيامنعمالمهم ما بعد البيع على أساس ، لا توفر الصور الافتراضية الواردة في حالة جيدة .

طرق علاج الخلايا المجمدة :بعد الحصول على الخلايا ، ومراقبة ما إذا كان هناك أي فائض من الجليد الجاف في رغوة مربع ، إذا كان هناك أي ذوبان الجليد في حالة تخزين الأنابيب المجمدة سليمة ، إذا كان هناك أي ذوبان الجليد الجاف التبخر أو الكسر ، يرجى التقاط الصور في الوقت المناسب والاتصال بنا . إذا لم يتم الاتصال بنا في غضون ثلاثة أيام من استلام الخلية ، ثم التقصير هو جيد . إذا كان لديك أي أسئلة حول النشاط ، يرجى الاتصال بنا في الوقت المناسب .لا اتصال مع الولايات المتحدة دون إذن من أجل استعادة الأنبوب الثاني لا توجد مشاكل ما بعد البيع .

خطوات زراعة الخلايا

(أ)مرور الخليةسإذالم يتجاوزعند 80 ٪ من درجة التقارب ، ثقافة السائل المعبأة في زجاجات يتم جمعها في أنبوب الطرد المركزي ، 5 مل من الثقافة المتوسطة هو المتبقي في 37 ℃ و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون .₂حاضنة الثقافة ؛إذا كانت كثافة الخليةسوبر80 ٪ ، يمكن أن تحمل على ثقافة فرعيةمنتدى

خلية ملتصقةالخطوات هي كما يلي :

1 ) إزالة الثقافة طاف ، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني دون الكالسيوم والمغنيسيوم الأيونات 1-2 مرات .

2 ) إضافة 1 مل من السائل الهضمي ( 0.25 في المائة trypsin-0.53mm EDTA ) في الثقافة زجاجة ، ووضعها في حاضنة لمدة 1 دقيقة ، ثم لاحظ تحت المجهر الهضم الخلوي ، إذا كان معظم الخلايا تصبح مستديرة و تقشر ، بسرعة العودة إلى طاولة العمليات ، اضغط على عدة زجاجات الثقافة ، إضافة 6 مل تحتوي على 10 ٪ مصلالثقافة المتوسطةإنهاء الهضم ؛

3 ) ضربة بلطف الخلايا ، بعد السقوط ، امتص في أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5-8min ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، ثم تهب بالتساوي .

4 ) 5-6 مل من كل زجاجة من وسائل الإعلام ، تعليق خلية مقسمة إلى نسبة 1 : 2 في 5-6 مل من وسائل الإعلام الجديدة التي تحتوي على 6 سم طبق الثقافة أو الثقافة T25 زجاجة .

أيواحد T25 زجاجة تلقيح في اثنين من زجاجات أو اثنين من 6 سم طبق الثقافة T25 )

تعليق خليةالخطوات هي كما يلي :

1 ، نصف طريقة تغيير السائل

شبه سائل تغيير العلاج ، عمودي زجاجة الثقافة في حاضنةحوالي 1 ساعة ، بلطف تمتص حوالي 3 مل من وسائل الإعلام ، ثم إعادة شحن 3 مل من وسائل الإعلام ، إذا كانت وسائل الإعلام تغيير اللون ببطء ، يمكن أن تضاف مباشرة إلى حوالي 500ul FBS ، مرور الوقت يمكن أن تكون مباشرة إعادة شحن 5 مل من وسائل الإعلام الثقافة مقسمة إلى اثنين من زجاجات الثقافة ، في العام ، مثل مرور حوالي 3 مرات يمكن أن يكون الطرد المركزي مرور مرة واحدة ، وإزالة الخلايا الميتة .

الطرد المركزي السائل طريقة الصرف

تعليق خلية يمكن جمعها في أنبوب الطرد المركزي إذا لزم الأمر .1000rpm， الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، إزالة طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، ثم إعادة تعليق ، ثم تقسيم تعليق خلية جديدة في زجاجة T25 حسب نسبة 1 : 2 ، إضافة 6-8ml متوسطة الثقافة الجديدة وفقا لمتطلبات المواصفات للحفاظ على نمو الخلايا وحيويتها ، بعد مرور وفقا للظروف الفعلية في نسبة 1 : 2-1 : 5 .

ب،تجميد الخلايا

1 . عندما تنمو الخلايا إلى 80 ٪ من مساحة الثقافة زجاجة ، زجاجة الثقافة T25 هو التخلي عن استخدام برنامج تلفزيوني لتنظيف الخلايا مرة واحدة .

2 ، إضافة 0.25 ٪ عصير الهضم حوالي 1 مل في الثقافة زجاجة ، لاحظ تحت المجهر المقلوب ، بعد تراجع الخلايا إلى جولة ، إضافة 5 مل من الثقافة المتوسطة لوقف الهضم ، ثم بلطف ضربة قبالة الخلايا ، ثم نقل إلى تعليق 15 مل أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق .

3 . التخلي عن supernatants ، إضافة 1 مل من الخلايا المترسبةرقم الشحن :C7001）， تخلط جيدا ثم تضاف إلى تجميد تخزين الأنابيب .

4 - وضع الخلايا المجمدة مباشرة في-80 ℃ الثلاجة يمكن أن يكون ، مثل في وقت لاحقيجبنقل الخلايا إلى خزان النيتروجين السائل ،سايمطلوبدرجة حرارة الثلاجةوسطتخزينأكثر من 24 ساعةمرة أخرىفي النيتروجين السائل للدبابات .

جيم،إنعاش الخلايا

وإزالة الخلايا من النيتروجين السائل عن طريق الحفظ بالتبريد )انتبهارتدىحمايةقناع ) ، وضعه بسرعة الحل في 37 ℃ حمام الماء حتى لا تبلور ، ثم مسح الجدار الخارجي مع 75 ٪ من الكحول .

ونقل الخلايا في أنبوب المجمدة تحتوي على في 15 مل أنبوب الطرد المركزي ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق .

والتخلص من طاف5ml متوسطة تعليق التلقيحإلىT25 قارورة الثقافة ،ضعفي37 ℃ ، 5٪ CO₂الخلايا المستزرعة في حاضنة .

وفي اليوم التالي ، تم استبدال وسائل الإعلام الجديدة لمواصلة الثقافة .

ملاحظة :بعض الخلايا لا تلتزم بقوة الجدار ، في عملية النقل من السهل أن يحدث فقدان الخلايا ، وهذا هو ظاهرة طبيعية . إذا كان هناك المزيد من الانفصال ، كل ثقافة السائل في زجاجة يمكن جمعها في أنبوب الطرد المركزي ،1000rpm الطرد المركزي 5min ،جمع طافالثقافة الانتقالية( في وقت لاحق مقارنة الثقافة )هطول إضافة1-2ml， ضربة خفيفة ، تعليق الثقيلة ، هضم 1-2 دقيقة ، إضافة 5 مل متوسطة لإنهاء رد الفعل . ثم الطرد المركزي ، تخلى طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة تعليق الثقيلة . بعد ذلك ، تم تقسيمها إلى اثنين من قارورة ( T25 ) حسب نسبة 1 : 2 ، متوسطة جديدة أضيفت إلى 5-8ml / زجاجة ، وأخيرا 37 ℃ ، 5 ٪ CO₂خلية ثقافة مربع .