الكارب العشب خط الخلية الكلوية ( CIK )

اسم المنتج :الكارب العشب خط الخلية الكلوية ( CIK )

المواصفات : 1x106cells / T25 أو 1ml تجميد أنبوب

مورفولوجيا الخلايا الظهارية مثل نمو ملتصقة

متوسطة : CIK العشب الكارب الخلايا الكلوية متوسطة الثقافة ، 28 درجة أو 21 درجة

المصدر : العشب الكارب

مصدر الأنسجة : الكلى

خصائص النمو : نمو ملتصقة

مورفولوجيا الخلايا الظهارية

خلية الجبر : في غضون 10 أجيال

مواصفات الخلية : 1 × 106cells / T25 قارورة أو 1ml تجميد أنبوب التعبئة والتغليف

الميكوبلازما الكشف : لا

CIK العشب الكارب ( ctenopharyngodon idellus )

ظروف التخزين المجمد : المصل خالية من السوائل المجمدة ، النيتروجين السائل التخزين

خلية شحن : حوالي 2 أسابيع

طريقة الشحن : استرداد الشحن ( T25 زجاجة مجانا رسوم الشحن )

رقم الشحن : cs-c2909

طرق الحفاظ على الخلايا بالتبريد :
طريقة الحفظ بالتبريد : تجميد أنبوب يوضع في 4 ℃ 30 ~ 60 دقيقة ( - 20 ℃ 30 دقيقة * ) - 80 ℃ 16 ~ 18 ساعة ( أو بين عشية وضحاها ) النيتروجين السائل خزان vaporphase التخزين على المدى الطويل .
طريقة الحفظ بالتبريد 2 : تجميد أنبوب يوضع في برمجة آلة التبريد مع مجموعة من الإجراءات التي يمكن أن تقلل من 1-3 درجة مئوية إلى أقل من 80 درجة مئوية في الدقيقة ، ثم يوضع في خزان النيتروجين السائل vapor المرحلة للتخزين على المدى الطويل . * * * * * * * * * * * * * * 20 ℃ يجب أن لا تتجاوز 1 ساعة لمنع الإفراط في بلورة الثلج ، مما تسبب في موت الخلايا ، يمكنك تخطي هذه الخطوة مباشرة في - 80 ℃ الثلاجة ، ولكن معدل البقاء على قيد الحياة أقل قليلا .

نسيج البشرة يتكون من اكتودرمال الجنين ، والتي يمكن أن تقاوم الاحتكاك والضرر . شركة التكنولوجيا يوفر جودة عالية من مجموع الحمض النووي الريبي ، حبلا كدنا ، والبروتينات ومكوناتها من إعداد الاسترداد من الطازجة أو المجمدة الجنين أنسجة البشرة من الفئران . جميع المنتجات التي يتم شحنها من خلال عملية صارمة لضمان الجودة / مراقبة الجودة لضمان الجودة . هذه المنتجات يمكن أن تستخدم مباشرة في استنساخ الجينات والتعبير الشخصي وتحليل مختلف التجارب البيولوجية الجزيئية .
إعداد مجموع الحمض النووي الريبي :الجيش الملكي النيبالي كان مفصولة تريزول كاشف عن qiagen rneasy كيت ، ثم تم تنقيته من قبل qiagen الجيش الملكي النيبالي تنظيف كيت . مجموع الحمض النووي الريبي عينة قدمتها الشركة المرفقة مع مجموع تركيز الحمض النووي الريبي ، مجموع المحتوى ، الكهربي الصور ، التطوير التنظيمي ، وهلم جرا .

إعداد كدنا :مجموع الحمض النووي الريبي هو توليفها من قبل تنقية كدنا حبلا ، ثم النسخ العكسي تتم في 50 ul مجموع نظام رد الفعل ، بما في ذلك mmlv المنتسخة العكسية و كلمة التمهيدي و 10 ملغ مجموع الحمض النووي الريبي . رد الفعل انتهى في 68 ℃ لمدة 10 دقائق . باستخدام 1 × RT - PCR العازلة لنقل كدنا ، 1 ulcdna كافية لجعل تفاعل البلمرة المتسلسل . جميع المنتجات التي تم تحليلها من قبل صارمة كدنا سؤال وجواب / مراقبة الجودة لضمان جودة المنتج قبل الشحن .

إعداد البروتين :تحسين استخدام نوع RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin) طرق تقسيم السائل من أنسجة البشرة الجنين من الفئران تم إعداده من قبل الطرد المركزي لإزالة شظايا الأنسجة ، وتركيز البروتين تم الكشف عنها من قبل bio-rad كاشف عدة ، ثم تم الحفاظ على البروتين المخفف مع 5 ٪ β - mercaptoethanol و pmsf في درجة حرارة تتراوح بين 50 ملم تريس حمض الهيدروكلوريك ، الرقم الهيدروجيني 6.8 ، 5 ٪ جليسيرول ، 1 ٪ الحزب الديمقراطي الصربي ، 0.002 ٪ bromphenol الأزرق .

التطبيقات المحتملة : < 1 > بكر استنساخ الجينات المعروفة . < 2 > مرنا الربط البديلة ؛ < 3 > الاستنساخ وتسلسل الجينات المستهدفة ؛ <4>Western and Northern Blot； < 5 > الكشف عن البروتين والبروتيوميات . < 6 > رقاقة البحث والتعبير الشخصي .

معالجة الخلايا

1 ) استعادة الخلايا : تجميد أنبوب يحتوي على 1 مل من تعليق خلية وضعت بسرعة في حمام مائي في 37 درجة مئوية ( سطح الماء يجب أن يكون أقل من تجميد أنبوب غطاء ) يهز وذوبان ، انتقل إلى إعداد 15 مل أنبوب الطرد المركزي تحتوي على 4 مل متوسطة الثقافة مختلطة بالتساوي . بعد الطرد المركزي لمدة 4 دقائق في 1000 دورة في الدقيقة ، supernatants تم التخلص منها ، و 1 مل متوسطة الثقافة أضيفت إلى الخليط ثم تهب بالتساوي . كل تعليق الخلية ثم نقلها إلى زجاجة تحتوي على 5 مل متوسطة الثقافة بين عشية وضحاها . تغيير السوائل في اليوم التالي و فحص كثافة الخلية .
2 ) مرور الخلية : إذا كانت كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور الثقافة .
وفيما يتعلق بتعليق الخلايا ، يمكن الرجوع إلى الطرق التالية :
طرق : جمع الخلايا ، 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق ، وإزالة طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، ثم تهب بشكل موحد ، ثم تقسيم الخلية تعليق في طبق جديد أو زجاجة تحتوي على 8 مل متوسطة الثقافة حسب نسبة 1 : 2 إلى 1 : 5 .
الطريقة الثانية : اختيار نصف طريقة تغيير السائل ، بعد التخلي عن نصف متوسطة الثقافة ، تعليق الخلايا المتبقية ، تقسيم تعليق خلية جديدة في طبق أو زجاجة تحتوي على 8 مل متوسطة الثقافة حسب نسبة 1 : 2 إلى 1 : 3 .
3 ) الحفاظ على الخلايا : عندما تكون الخلايا في حالة جيدة من النمو ، يمكن الحفاظ على الخلايا بالتبريد . تعليق خلية ينبغي جمعها ، 1000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق ، والحفاظ على كمية صغيرة من طاف ( لمنع امتصاص الخلايا ) ، إضافة بعض وسائل الإعلام الجديدة ، ضربة موحدة ، إضافة إلى تجميد أنبوب ، أنبوب التخزين المجمد بعد إضافة 10 ٪ DMSO يهز . تجميد تخزين متوسطة
أوصت بالتبريد متوسطة يجب أن تستخدم في الحفاظ على الخلايا . يجب أن تحتوي على وسائل الإعلام cryoprotectant DMSO أو الجليسرين . كما يمكن استخدام وسائل الإعلام الخاصة بالتبريد .
1 ) تجميد خلية ثقافة المتوسط هو نوع من لحظة تجميد خلية الثدييات متوسطة الثقافة ، التي تحتوي على مصل بقري جنيني ( FBS ) و مصل بقري ( جيش صرب البوسنة ) نسبة الأمثل ، والتي يمكن تحسين حيوية الخلية ، فضلا عن تأثير الانتعاش بعد ذوبان الجليد .
2 ) cryopreserved متوسطة هي واحدة من المكونات الكيميائية ، خالية من البروتين ، العقيم cryopreserved متوسطة ، تحتوي على 10 ٪ دمسو ، ومناسبة لمجموعة متنوعة من الخلايا الجذعية والخلايا الأولية ( باستثناء الخلايا الصباغية ) cryopreserved . . . . . . .
عملية تدفق :
1-1 الكواشف والأدوات الرئيسية : مجهر تباين الطور المقلوب ( IMT-413 Olympus Japanese ) ، حاضنة CO2 ( Yamato It-61 Japanese ) .
1-2 إحياء الثقافة و الحفاظ على خلايا hek-293 بالتبريد :
1-2-1 خلية ثقافة الانتعاش من النيتروجين السائل خزان إزالة أنبوب التخزين المجمد ، على الفور في 37 ℃ حمام الماء ، و يهز باستمرار ، بحيث تذوب بسرعة . إزالة الخلايا الذائبة بالتبريد أنبوب ، فتح مع الكحول ، وامتصاص الخلايا الذائبة بالتبريد السائل ، إضافة إلى تحميلها مسبقا متوسطة ( 37 ℃ سخن ، 8-10 مرات حجم ) أنبوب الطرد المركزي ، ضربة قليلا ، والخلط ، ثم 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق ، إزالة طاف ، إضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة ، ضربة في تعليق خلية ، مع كثافة 1 × 105 / مل في 25 سم 2 زجاجة الثقافة ، في 37 ℃ ، 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون و الرطوبة المشبعة الثقافة .
1-2-2 الخلايا المستزرعة hek-293 الخلايا المستزرعة في الثقافة الابتدائية تم استبدالها مرة واحدة في 48 ساعة عندما كانت الخلايا تنصهر إلى 60 ٪ ~ 70 ٪ ، تم هضمها لمدة 1 ~ 2 دقيقة مع 0.25 في المائة ، ثم الثقافة قارورة كان ضرب برفق مع النخيل لجعل الخلايا dewalled وتعليق تفريق .
1-3 مورفولوجيا الخلايا لوحظ وسجلت تحت المجهر المقلوب .
1-4 عد خلايا الجهاز الهضمي التقليدية ، مثل الخلايا تصبح الجولة ، وإزالة الجدار ، تطفو ، إضافة كمية صغيرة من وسائل الإعلام الطرد المركزي ، ثم إعادة تعليق PBS تهب على شكل تعليق . خلية صغيرة تعليق أضيفت على جانب واحد من لوحة العد ، وعدد من الخلايا في الزوايا الأربع من لوحة العد لوحظ مع 10 × عدسة الهدف ، وعدد الخلايا حسبت حسب الصيغة . عدد الخلايا / مل من الحل الأصلي = ( مجموع عدد الخلايا / 4 ) × 104 .
1.5 الخلايا في مرحلة النمو المتسارع ، تم هضمها في تعليق خلية واحدة بنسبة 0.25 في المائة ، ثم تلقيح في 12 25 سم 2 قوارير الثقافة ، على التوالي ، ثلاث زجاجات من الخلايا تم اختيارها عشوائيا كل ساعتين ، متوسطة الثقافة و unadhesive الخلايا تم امتصاصه ، هضم الخلايا adhesived بواسطة انزيم الهضم البنكرياس و عد الخلايا adhesived . . . . . . .
1-6 تعليق خلية واحدة تم هضمها من قبل الخلايا في مرحلة النمو المتسارع من منحنى النمو ، ثم تم تلقيح في 24 لوحة مع 1 × 104 / المسام ، و 1 مل من الثقافة المتوسطة أضيفت إلى كل مسام . كل يوم 3 ثقوب عشوائيا ، عد عدد الخلايا في كل حفرة و حساب متوسط القيمة . عد 10 أيام متتالية ، رسم منحنى نمو الخلايا .

وفيما يلي المنتجات ذات الصلة :

طقم اختبار للكشف عن الأجسام المضادة ضد مرض الحمى القلاعية البقري

طقم اختبار للكشف عن الأجسام المضادة ضد مرض الحمى القلاعية في الأغنام

d-ribose مد ريبوز 1 , 2 , 3-tri ( رابطة الدول المستقلة ، ورابطة الدول المستقلة ) - ( 9 , 12-octadecadioyl الجلسرين استر )

Oleanolic حمض ( Oleanolic Oleanolic Oleanolic Oleanolic Oleanolic Oleanolic حمض )
الكارب العشب خط الخلية الكلوية ( CIK ) حقوق الليباز A2 إليسا كيت ≥ 4190 ٪ كما تم تحديدها من قبل صفحة الحزب الديمقراطي الصربي 2 , 5-diphenylene

حقوق glucosemutase إليسا كيت ≥ 4191 ٪ كما determined من صفحة الحزب الديمقراطي الصربي 4-chloro-6-yl-5-fluoropyrimidine

حقوق اينوزيتول 3 كيناز إليسا كيت

إليسا عدة حقوق الأدينوساين تنشيط بروتين كيناز 4 94 ٪ كما تم تحديدها من قبل صفحة الحزب الديمقراطي الصربي ن ' - ( 4 ، 4 ' - diphenyl imide عقد maleimide الوحيدات )

إليسا عدة حقوق خارج الخلية إشارة ينظم كيناز

إليسا عدة حقوق كابا عامل النووية ب المانع من البروتين

إليسا عدة حقوق بروتين كيناز C 4 97 ٪ كما تم تحديدها من قبل صفحة الحزب الديمقراطي الصربي 2 , 4 , 5-trithiazole

حقوق fructokinase إليسا كيت

إليسا عدة حقوق الجلسرين mutase 2 ≥ 4199 ٪ كما determined من صفحة الحزب الديمقراطي الصربي 4-fluoro-3-ylbenzaldehyde

إليسا عدة حقوق lymphokine 4200 ٪ كما تم تحديدها من قبل صفحة الحزب الديمقراطي الصربي 2 , 3-dipyridine

الخلايا اللمفاوية البشرية chemokines إليسا كيت

طقم إليسا عن مستضد الخلايا اللمفاوية البشرية 6 معقدة موضع 4202 ٪ كما تم تحديدها من قبل صفحة الحزب الديمقراطي الصربي l-valamine استر الملح العالي

وظيفة الخلايا اللمفاوية البشرية المرتبطة مستضد 3 إليسا كيت

وظيفة الخلايا اللمفاوية البشرية المرتبطة مستضد 2 إليسا كيت

تقرير تجريبي
الفصل و الثقافة :
1 - في ظل ظروف معقمة ، الأذين الأنسجة من 1-3d-old الفئران SD تم استخراجها ، ثم تم غسلها مع برنامج تلفزيوني 2 مرات .
2 - إضافة 4 مل من انزيم الهضم حل ( 0.1 في المائة 0.1 في المائة كولاجيناز أنا ) إلى الأنسجة كتلة ، تعليق لمدة 10 ثوان ، والهضم في 37 ℃ لمدة 10 دقائق ، ثم ضربة بالقطارة لجعل تعليق خلية واحدة ، هطول الأمطار الطبيعية وجمع طاف ، مع 10 ٪ FBS وسائل الإعلام إنهاء الهضم بعد 4 ℃ . . . . . . .
3 - إضافة 3-4ml انزيم الهضم حل بقية الأنسجة ، تعليق لمدة 10 ثوان ، هضم في 37 ℃ لمدة 10 دقائق ، ثم جمع supernatants ووضع في 4 ℃ بعد إنهاء الهضم .
4 ، 200 شبكة الفولاذ المقاوم للصدأ الشاشة المستخدمة لتصفية الخلية الهضم ، 1200r / دقيقة الطرد المركزي لمدة 10 دقائق ، إزالة طاف ، 10 ٪ من dmem FBS / F12 الخلايا المترسبة مع تعليق متوسطة ، تلقيح في 25 سم 2 زجاجة ، وضعت في 37 ℃ ، 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون حاضنة الثقافة ؛
5 - بعد 1 ساعة من الخلاف ، متوسطة الثقافة امتص و تلقيح في 6-hole لوحة .
ثانيا - تحديد مناعي :
1 . عندما الخلايا العضلية الأذينية تنمو إلى 80 ٪ فيوجن ، الخلايا التي تم غسلها مرتين مع برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ، ثم الخلايا كانت ثابتة لمدة 15 دقيقة مع 4 ٪ polyformaldehyde في درجة حرارة الغرفة .
2 - برنامج تلفزيوني شطف الخلايا مرتين في كل مرة لمدة 10 دقائق ، ثم في 4 ℃ 0.1 ٪ تريتون x-100 غشاء نفاذية لمدة 15 دقيقة .
3 - برنامج تلفزيوني شطف الخلايا مرتين ، كل 10 دقائق ، ثم في درجة حرارة الغرفة مع 4 ٪ جيش صرب البوسنة لمدة 30 دقيقة .
4 ، وفقا لنسبة 1 : 100 تمييع α - أكتين ، ثم وضعها في الثلاجة لمدة 4 ℃ احتضان الخلايا بين عشية وضحاها .
5 - برنامج تلفزيوني شطف الخلايا ثلاث مرات ، كل 10 دقائق ، وفقا لنسبة 1 : 150 تمييع المضادة α - أكتين ، في 37 ℃ لمدة 1 ساعة .
6 - برنامج تلفزيوني شطف 3 مرات في كل مرة لمدة 10 دقائق ، ثم لاحظ الصورة تحت المجهر مضان مقلوب وأخذ الصور .