الكشف عن الخلايا عامل كاسباس 389

الكشف عن الخلايا عامل كاسباس 389

كاسباس3

كاسبازهو بروتين الأسرة التي تلعب دورا هاما في موت الخلايا المبرمج . كاسباس 3 ، المعروف أيضا باسم cpp32 ، هو الانزيم الرئيسي في عملية موت الخلايا المبرمج ، يمكن قص procaspase2.6.7 و 9 ، ويمكن مباشرة و تحديدا قطع العديد من ركائز كاسباس ، بما في ذلك PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin ( و ( فودرين هذه البروتينات بوساطة كاسباس 3 هي جزء مهم من الآلية الجزيئية الخلايا . كاسباس 3 يلعب أيضا دورا رئيسيا في موت الخلايا المبرمج للخلية ، بما في ذلك

تجزئة الحمض النووي ، الخ . وفي الوقت نفسه ، caspase 3 يلعب دورا رئيسيا في الخلية تقرحات .

مبدأ الكشف على أساس casepase 3 يمكن أن تحفز الركيزة ac-devd-pna لإنتاج الأصفر PNA ( itroaniline ) ، وبالتالي يمكن الكشف عن نشاط كاسباس 3 من خلال تحديد الامتصاصية . PNA امتصاص قوي بالقرب من 405nm . . . . . . . وفقا لمعيار منحنى الأصفر المنتج PNA ، فإنه يمكن استخدامها كمعيار لتحديد نشاط caspase 3 الانزيمات .

كاسباز-8

caspase 8 عادة ما تكون موجودة في شكل proenzymic وتنشيط الخلايا إشارة تنبيغ . caspase 8 يعتبر المنبع caspase خلال الخلايا إشارة تنبيغ . caspase 8 هو تفعيلها من خلال فاس receptor و tnfr-1 بوساطة الخلايا على شكل ديمر P18 و P10 ، كذلك ينشط المصب caspase 4 و 6 . Caspase 9 و Caspase 10 . على أساس caspase 8 الأسلوب يمكن أن تحفز الركيزة ac-ietd-pna لإنتاج الأصفر PNA ، وبالتالي فإن نشاط caspase 8 يمكن الكشف عنها من خلال تحديد الامتصاصية . PNA امتصاص قوي بالقرب من 405nm . . . . . . . نشاط caspase 8 يمكن حسابها عن طريق قياس 405nm التطوير التنظيمي مع الإشارة إلى منحنى القياسية التي تنتجها الحمض النووي الريبي .

كاسباز-9

كاسباس 9 ، المعروف أيضا باسم ice-lab6 أو mch6 ، هو خليةموت الخلايا المبرمجإشارة تنبيغ المنبع كاسباس . بعد الإفراج عن سيتوكروم ج الميتوكوندريا ، caspase 9 يمكن أن تشكل مجمعات مع سيتوكروم ج و apaf1 وتفعيل في نفس الوقت . تفعيل caspase 9 يمكن تفعيل caspase 3 ، وهو الانزيم الرئيسي في موت الخلايا المبرمج ، وبالتالي تعزيز الخلايا اللاحقة إشارة . تفعيل caspase 9 يمكن تنظيمها من خلال الفسفرة .

هذه الطريقة تقوم على caspase 9 يمكن أن تحفز إنتاج " الأصفر " PNA ( p-nitroaniline ) من الركازة ميلان - LEHD - PNA .

نشاط كاسباس 9 . PNA امتصاص قوي بالقرب من 405nm . . . . . . . نشاط caspase 9 يمكن حسابها عن طريق قياس 405nm التطوير التنظيمي مع الإشارة إلى منحنى القياسية التي تنتجها الحمض النووي الريبي .

كاسباس1

كاسباس2

كاسباس4

كاسباس6

موت الخلايا المبرمج عامل كاسباس 33 / 8 / 9 إعداد عينة الاختبار :

1 ) عينات من الخلايا : 1 × 107 خلايا ( حوالي 1 T25 خلية ثقافة زجاجة المبلغ ) ، 600g 4 ° C الطرد المركزي لمدة 5 دقائق لجمع الخلايا ، بعناية إزالة طاف ، برنامج تلفزيوني يغسل مرة واحدة . بعد supernatants تم استيعابها ، 100u | ليزات أضيفت إلى كل خلية أنبوب عينة ، ثم إعادة تعليق هطول الأمطار . 4 ° C 16 , 000g الطرد المركزي لمدة 10-15 دقيقة ، نقل طاف في precooling أنبوب الطرد المركزي الجليد حمام . على الفور تحديد نشاط انزيم caspase 3 أو الحفاظ على العينات في - 70 درجة مئوية . وفي الوقت نفسه ، كمية صغيرة من العينات التي يمكن الحصول عليها عن طريق برادفورد طريقة تركيز البروتين يمكن أن تصل إلى 1-3 ملغ / مل .

2 ) عينات الأنسجة : حوالي 100ul ليزات أضيفت إلى كل 10 ملغ من الأنسجة ، متجانس في حمام الجليد مع الزجاج الخالط . ثم نقل الطين موحدة في 1.5ml ) أنبوب الطرد المركزي ، حمام الثلج ثم تصدع لمدة 5 دقائق . 4 ° C 16 , 000g الطرد المركزي لمدة 10-15 دقيقة ، نقل طاف في precooling أنبوب الطرد المركزي الجليد حمام . على الفور تحديد نشاط انزيم caspase 3 أو الحفاظ على - 70 درجة مئوية

عينة وفي الوقت نفسه ، كمية صغيرة من العينات التي يمكن الحصول عليها عن طريق برادفورد طريقة تركيز البروتين يمكن أن تصل إلى 1-3 ملغ / مل .

منحنى القياسية للكشف عن نشاط كاسباس 3

الفترة التجريبية : 7-10 أيام عمل كاملة ، تكرار الكشف عن الخصم .

ملاحظات العملاء

1 . الأجسام المضادة : استشارة مسبقةشنغهاي يان جينتحديد جنس الأجسام المضادة وما إذا كانت الأجسام المضادة يمكن استخدامها . إذا لم يكن هناك اتفاق بين الطرفين ، العميل شراء العرض أو شراء نيابة عن الشركة .

2 - جمع العينات وحفظها :

① عينات الأنسجة : الأنسجة الطازجة في النيتروجين السائل أو 70 درجة الحفاظ على الأنسجة لا تقل عن 100 ملغ ( حوالي مونج الفول الحجم ) ؛

② الخلايا المستزرعة : ما لا يقل عن 000 000 الخلايا المستزرعة في الجيش الشعبي أنبوب من خلال خلية العد ، إضافة 0.5 مل من محلول ملحي عادي أو البروتين وكيل وقائية ، وتخزينها في الثلاجة ( - 70 درجة مئوية ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان ) ؛

③ عينات من خلايا الدم : الحفاظ على عينات الدم مع تخثر الدم أو فصل الخلايا الليمفاوية مع فصل السائل بعد إضافة 0.5 مل من محلول ملحي عادي أو البروتين عامل الحماية ، والحفاظ على ( - 70 درجة مئوية يمكن الحفاظ عليها على المدى الطويل ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان )

عينات من مصل الدم أو خلية ثقافة السائل : الطرد المركزي إزالة الشوائب ، طاف في الجيش الشعبي أنبوب ، والحفاظ على ( فوق 4 درجات مئوية يمكن الحفاظ عليها لمدة 15-20 يوما - 70 درجة مئوية يمكن الحفاظ عليها لفترة طويلة ، وتجنب تكرار التجميد والذوبان )

3 ، عينة النقل : اختياري أي من الطرق التالية لإرسال العينة

① عينات الأنسجة والخلايا التي تم نقلها بواسطة الثلج الجاف أو إضافة البروتين واقية وكيل ، ثم نقلها بواسطة كيس الثلج .

② عينات من الخلايا يمكن أيضا أن تكون مباشرة عن طريق إرسال الثقافة زجاجة ( مختومة لضمان عدم التلوث ، لا تسرب الثقافة المتوسطة ، لا تنمو الخلايا كاملة جدا ، حوالي 50 ٪ ، وملء الثقافة المتوسطة ) ؛

③ مصل الدم أو طاف مباشرة بالإضافة إلى إرسال كيس الثلج ( مختومة لضمان عدم تسرب السائل ، اعتمادا على المسافة من 2-3 أيام يمكن أن تصل ) .

خدمة الجيل التجريبي :