الخلايا الصغيرة سرطان المعدة ecc10 الخلية البشرية

الخلايا الصغيرة سرطان المعدةECC10

مقدمةخطوط الخلايا البشرية المستمدة من سرطان المعدة ( سرطان الخلايا الصغيرة ) . الكرياتينين كيناز ، الخ .

رقم الشحنسWS-S1438

مواصفاتس1 × 10 خلية / T25 قارورة الثقافة

خلية المعلومات الأساسية

- مصدر الخلايا : المعدة

- مورفولوجيا الخلايا : lymphoblastoid ، تعليق النمو

-- محتوى الخلية : > 1 × 10 ⁶ الخلية / زجاجة

-- التعبئة المواصفات : T25 قارورة الثقافة / 1ml أنبوب التخزين المجمد

- استخدام المنتج : لأغراض البحث العلمي فقط ،لا تستخدم في علاج الأمراض الحيوانية أو البشرية .

وسائل الإعلام والثقافة شرط

1 - وسائل الإعلام

rpmi1640 متوسطة الثقافة ؛ 10 ٪ مصل بقري جنيني . مقاومة مزدوجة

المصل الموصى به :وينسيرا FBS500-WP-002

2 - ظروف الزراعة

- المرحلة الغازية : 95 ٪ الهواء + 5 ٪ CO ₂ درجة الحرارة : 37 ℃ ؛ حاضنة الرطوبة : 70-80%

3 - التخزين المجمد والتخزين

- التخزين المجمد : 90 ٪ مصل بقري جنيني + 10 ٪ DMSO

- ظروف التخزين : تخزين النيتروجين السائل على المدى الطويل

ثالثاً - أشكال النقل وعمليات الاستلام

1 . درجة الحرارة العادية الشحن ( T25 زجاجة من الخلايا الحية )

بعد تلقي الخلايا T25 قارورة الثقافة سطح الجسم التطهير ؛ وضع قارورة في حاضنة لمدة 2-3 ساعات . مراقبة كثافة الخلية ونموها ، تأخذ 2-3 صور واضحة التغذية المرتدة إلى المبيعات . كثافة الخلية يمكن أن تصل إلى مستوى ، نسبة 1 : 2 في وقت مبكر . عندما تكون الخلية كاملة مرة أخرى ، واحدة من زجاجة كاملة من الخلايا المجمدة في 1 مل من أنبوب التخزين ، زجاجة أخرى استمرت في الانتشار . واقترح أن 2-3 بذور الخلايا المجمدة مرارا وتكرارا ، ثم توسيع نطاق التجربة ، وذلك لتجنب حالة مفاجئة من الخلايا .

ملاحظة : وسائل الإعلام المستخدمة في النقل لا يمكن أن تستخدم في زراعة الخلايا ، يرجى استبدال وسائل الإعلام الجديدة التي تم إعدادها وفقا لشروط تعليمات زراعة الخلايا . بعد تلقي اقتراح الخلية T25 قارورة الثقافة مرت في 1 : 2 .

2 . الثلج الجاف الشحن ( تجميد تخزين الخلايا )

الشحن التقليدية اثنين من أنابيب التخزين البارد ، اقترح استرداد واحد ، والحفاظ على احتياطي واحد . إذا فشل الانتعاش ، وفقا صارمة مع الشركة المصنعة القياسية عملية الانتعاش لتشغيل الفرع الثاني . إذا فشل الانتعاش على حد سواء ، يرجى الحفاظ على الصورة كاملة من الانتعاش على الفور وإبلاغ عملية البيع في الوقت المناسب .

خطوات زراعة الخلايا

1 - إنعاش الخلايا المجمدة

- وضع 1 مل من تعليق الخلية في حمام مائي في 37 ℃ ويهز بسرعة حتى يذوب .

- إضافة أنبوب الطرد المركزي يحتوي على 4-6 مل من متوسطة الثقافة إلى المزيج بلطف .

- الطرد المركزي 1000RPM لمدة 3-5 دقائق ، والتخلص من طاف؛

- إعادة تعليق الخلايا في وسائل الإعلام وتطعيمها في قارورة / طبق يحتوي على 6-8 مل من وسائل الإعلام؛

الخلايا المستزرعة في 37 ℃ بين عشية وضحاها ، في اليوم التالي ، نمو الخلايا و الكثافة لوحظ تحت المجهر .

2 - يمكن الإشارة إلى الطرق التالية من أجل تمرير خلية ملتصقة : ( كثافة الخلية 80 ٪ - 90 ٪ يمكن أن تمر )

- التخلص من طاف و تغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بدون الكالسيوم والمغنيسيوم الأيونات 1-2 مرات .

- إضافة 0.25 في المائة ( ث / ت ) يي protease-0.53 ملم EDTA في قارورة ( T25 1-2ml ، T75 2-3ml ) في 37 ℃ لمدة 1-2 دقيقة ( عسر الهضم الخلايا يمكن أن تطيل فترة الهضم بشكل صحيح ) ، ثم لاحظ تحت المجهر ، إذا كان معظم الخلايا تصبح مستديرة و تقشر ، بسرعة العودة إلى طاولة العمليات ، اضغط على قارورة عدة مرات ، إضافة 3-4ml تحتوي على 10 ٪ FBS لإنهاء الهضم .

- خفقت بلطف ثم امتص ، الطرد المركزي 3-5 دقائق في 1000 دورة في الدقيقة ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2 مل متوسطة الثقافة ، ثم تهب بالتساوي . تعليق خلية تم تقسيمها إلى 2 : 1 زجاجة جديدة T25 ، 6-8 مل من وسائل الإعلام الجديدة التي تم تكوينها وفقا لمتطلبات تعليمات للحفاظ على نمو الخلايا وحيويتها ، بعد مرور وفقا للظروف الفعلية في نسبة 1 : 2-1 : 5 .

3 - وفيما يتعلق تعليق الخلايا ، مرور يمكن الرجوع إلى الأساليب التالية :

- ملاحظة : النسبة الموصى بها من الجيل الثاني هو 1 : 2 ، في وقت لاحق نسبة يمكن أن تقرر وفقا لاحتياجات العملاء .

- الطريقة الأولى : جمع الخلايا ، الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 4 دقائق ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2ml متوسطة الثقافة ، ثم تهب بالتساوي ، تقسيم تعليق خلية في نسبة 1 : 2 إلى 1 : 5 في طبق جديد أو زجاجة تحتوي على 8 مل متوسطة الثقافة .

- الطريقة الثانية : اختيار نصف طريقة الصرف ، بعد التخلي عن نصف المتوسط ، تعليق الخلايا المتبقية ، تعليق الخلايا في نسبة من 1 : 2 إلى 1 : 3 في وعاء جديد أو زجاجة تحتوي على 8 مل متوسطة .

4 - تجميد الخلايا : بعد تلقي الخلايا ، فمن المستحسن للحفاظ على مجموعة من البذور في أول 3 أجيال من الثقافة لاستخدامها في التجارب اللاحقة .

خامسا - اعتبارات السلامة البيولوجية

1 - جميع الخلايا الحيوانية تعتبر خطرة بيولوجيا ، يجب أن تعمل في الصف ر السلامة البيولوجية مجلس الوزراء ، القيام بعمل جيد في الحماية الشخصية . جميع النفايات السائلة و الأواني التي تأتي في اتصال مع الخلايا يجب التخلص منها بعد التعقيم .

2 . ارتداء القفازات الواقية ، فو و هو قناع واقية عند استعادة الخلايا المجمدة . تجميد تخزين الأنابيب المغمورة في النيتروجين السائل قد تسرب وملء النيتروجين السائل ، عندما يذوب النيتروجين السائل التغويز من السهل أن يؤدي إلى انفجار الحاويات ، غطاء زجاجة تحطم الطائرة تسبب خدش الموظفين ، وما إلى ذلك ، يجب أن تكون حذرا في العملية .