- البريد الإلكتروني
- الهاتف
-
العنوان
منطقة بودونغ الجديدة ، شنغهاي
شنغهاي بيبو التكنولوجيا الحيوية المحدودة
مجموع البروتين استخراج عدة
قابلة للتفاوضتحديث05/06
- نموذج
- طبيعة المصنع
- المنتجين
- فئة المنتج
- مكان المنشأ
نظرة عامة
مجموع البروتين استخراج عدة تحتوي على صيغة فعالة قادرة على حل مكونات غشاء الخلية ، بما في ذلك غشاء البلازما ، غشاء النووية ومختلف العضيات الأغشية . مزيج من مثبطات الأنزيم البروتيني الواردة في عدة يمنع تدهور البروتين البروتيني ، ويوفر ضمانة لاستخراج البروتين عالية النقاء .
تفاصيل المنتج
الحفاظ على درجة الحرارة2-8℃
مجموع البروتين استخراج عدةالاحتياطات
1 - مثبطات الأنزيم البروتيني يمكن تخزينها في 2-8 ℃ قبل فتح الغطاء . بعد استخدام غطاء مفتوح - 20 ℃ التخزين .
2 - مثبطات الأنزيم البروتيني في درجة حرارة منخفضة 2-8 ℃ الحالة الصلبة ، بعد إزالة من الثلاجة إلى درجة حرارة الغرفة أو 37 ℃ حمام الماء لفترة قصيرة ، في حالة سائلة ، الطرد المركزي إلى أسفل الأنبوب ثم فتح الغطاء .
3 . بعد فتح كاشف ، يرجى استخدام في أقرب وقت ممكن !
2 - مثبطات الأنزيم البروتيني في درجة حرارة منخفضة 2-8 ℃ الحالة الصلبة ، بعد إزالة من الثلاجة إلى درجة حرارة الغرفة أو 37 ℃ حمام الماء لفترة قصيرة ، في حالة سائلة ، الطرد المركزي إلى أسفل الأنبوب ثم فتح الغطاء .
3 . بعد فتح كاشف ، يرجى استخدام في أقرب وقت ممكن !
صلاحية
سنة
طريقة الكشف
WB ، IP ، Co-IP ، ELISA ، EMSA 等
عينة مناسبة
الخلايا / الأنسجة الحيوانية
مجموع البروتين استخراج عدةميزات المنتج
1 . سهلة الاستخدام ، استخراج البروتين من الخلايا والأنسجة لا تحتاج إلى طحن ، مرارا وتكرارا تجميد ذوبان بالموجات فوق الصوتية ، مثل سحق المعالجة .
2 - عملية استخراج بسيطة ومريحة ، وتقصير الوقت استخراج البروتين إلى 30 دقيقة - 1 ساعة .
3 . تحتوي على بروتين مثبت ، استخراج البروتين مستقرة .
4 - خلفية تدخل منخفضة عند الكشف عن تركيز البروتين بواسطة الأشعة فوق البنفسجية .
5 - مجموع استخراج البروتين يحتوي على العديد من المكونات النشطة التي يمكن أن الإفراج عن السيتوبلازم البروتين ، البروتين النووي والبروتين الغشاء ، ولكن أيضا جنبا إلى جنب مع الافراج عن البروتين لمنع هطول الأمطار .
6 - مثبطات الأنزيم البروتيني تمنع تدهور البروتين ، مثبطات الأنزيم البروتيني الصيغة الأمثل . مثبطات الأنزيم البروتيني خليط يتكون من ستة مستقلة مثبطات الأنزيم البروتيني ، aebsf apotinin , leupeptin , pepstatin , bestatin , و e-64 ، كل منها على وجه التحديد يمنع نشاط واحد أو أكثر من البروتياز . التكوين الأمثل من الخليط يمكن أن تمنع تقريبا كل نشاط البروتياز البروتيني ، بما في ذلك ، semiprotease ، الأسبارتيك البروتيني ، alanyl أمينوببتيداز ، الخ .
2 - عملية استخراج بسيطة ومريحة ، وتقصير الوقت استخراج البروتين إلى 30 دقيقة - 1 ساعة .
3 . تحتوي على بروتين مثبت ، استخراج البروتين مستقرة .
4 - خلفية تدخل منخفضة عند الكشف عن تركيز البروتين بواسطة الأشعة فوق البنفسجية .
5 - مجموع استخراج البروتين يحتوي على العديد من المكونات النشطة التي يمكن أن الإفراج عن السيتوبلازم البروتين ، البروتين النووي والبروتين الغشاء ، ولكن أيضا جنبا إلى جنب مع الافراج عن البروتين لمنع هطول الأمطار .
6 - مثبطات الأنزيم البروتيني تمنع تدهور البروتين ، مثبطات الأنزيم البروتيني الصيغة الأمثل . مثبطات الأنزيم البروتيني خليط يتكون من ستة مستقلة مثبطات الأنزيم البروتيني ، aebsf apotinin , leupeptin , pepstatin , bestatin , و e-64 ، كل منها على وجه التحديد يمنع نشاط واحد أو أكثر من البروتياز . التكوين الأمثل من الخليط يمكن أن تمنع تقريبا كل نشاط البروتياز البروتيني ، بما في ذلك ، semiprotease ، الأسبارتيك البروتيني ، alanyl أمينوببتيداز ، الخ .
تطبيق المنتج
WB ، IP ، Co-IP ، ELISA ، EMSA 等
إعداد الصك
1 - أجهزة الطرد المركزي
2 . مذبذب
3 . خلاط / خلاط
4 . دوامة خلاط
5 - الماصة
6 - الثلاجات
7 . الجليد مربع
2 . مذبذب
3 . خلاط / خلاط
4 . دوامة خلاط
5 - الماصة
6 - الثلاجات
7 . الجليد مربع
إعداد الكواشف
برنامج تلفزيوني العازلة
2 - طقم قياس البروتين
2 - طقم قياس البروتين
إعداد المواد الاستهلاكية
1 . أنابيب الطرد المركزي
2 . شفط
3 . المتاح القفازات
2 . شفط
3 . المتاح القفازات
استخدام الاحتياطات
· برغي غطاء أنبوب الطرد المركزي المثبتة في كاشف قبل فتح الغطاء لفترة وجيزة الطرد المركزي ، غطاء الجدار الداخلي من السائل إلى أسفل الأنبوب ، لتجنب فتح الغطاء عندما رش السائل .
· مثبطات الأنزيم البروتيني في 2-8 ℃ الحالة الصلبة ، بعد إزالة من الثلاجة إلى درجة حرارة الغرفة أو 37 ℃ حمام الماء لفترة قصيرة ، في حالة سائلة ، الطرد المركزي إلى أسفل الأنبوب ثم فتح الغطاء .
· جميع الكواشف يجب precooling أثناء التجربة . جميع الأجهزة يجب أن تكون مبردة في الثلاجة - 20 ℃ . . . . . . . العملية برمتها يجب أن تبقى العينة في درجة حرارة منخفضة .
· مثبطات الأنزيم البروتيني أثناء التخزين الحل إذا كان هطول الأمطار ، لا تؤثر على استخدام حل بعد الاستخدام العادي .
· إذا كانت مجموعات لا يمكن استخدامها في وقت قصير ، مثبطات الأنزيم البروتيني الخليط لا يمكن أن تضاف إلى استخراج مرة واحدة .
· يمكن أن تضاف إلى غيرها من مثبطات الأنزيم البروتيني حسب التجربة الخاصة بك الاحتياجات .
إذا كان المصب هو اختبار نشاط الأنزيم البروتيني أو الفوسفاتيز محددة ، يمكن استخراج دون إضافة مثبطات الأنزيم البروتيني أو مثبطات الفوسفاتيز ، وإيلاء الاهتمام إلى عملية الاستخراج للحفاظ على درجة حرارة منخفضة ، وتقصير وقت الطرد المركزي .
في لطخة غربية ، بيتا أكتين ، gapdh و توبولين يمكن اختيارها .
سرعة الطرد المركزي الطرد المركزي قوة نسبية ( RCF ، س ز ) و ( دورة في الدقيقة ، ص / دقيقة ) طريقتين للتعبير عن بعض أجهزة الطرد المركزي الطرد المركزي مع دورة في الدقيقة و س ز عرض التبديل ، ولكن بعض أجهزة الطرد المركزي لا التبديل التلقائي وظيفة . الصيغة التالية يجب أن تستخدم لتحويل : ز = ص × 1.118 × 10-5 × rpm2 ( ص = 10 × 1.118 × 10-5 × 30002 ) = 10 × 1.118 × 10-5 × 30002 = 1006.2 ( × ز ) على سبيل المثال : سرعة دوران 3000rpm ، فعالة قطرها 10 سم ) .
· مثبطات الأنزيم البروتيني في 2-8 ℃ الحالة الصلبة ، بعد إزالة من الثلاجة إلى درجة حرارة الغرفة أو 37 ℃ حمام الماء لفترة قصيرة ، في حالة سائلة ، الطرد المركزي إلى أسفل الأنبوب ثم فتح الغطاء .
· جميع الكواشف يجب precooling أثناء التجربة . جميع الأجهزة يجب أن تكون مبردة في الثلاجة - 20 ℃ . . . . . . . العملية برمتها يجب أن تبقى العينة في درجة حرارة منخفضة .
· مثبطات الأنزيم البروتيني أثناء التخزين الحل إذا كان هطول الأمطار ، لا تؤثر على استخدام حل بعد الاستخدام العادي .
· إذا كانت مجموعات لا يمكن استخدامها في وقت قصير ، مثبطات الأنزيم البروتيني الخليط لا يمكن أن تضاف إلى استخراج مرة واحدة .
· يمكن أن تضاف إلى غيرها من مثبطات الأنزيم البروتيني حسب التجربة الخاصة بك الاحتياجات .
إذا كان المصب هو اختبار نشاط الأنزيم البروتيني أو الفوسفاتيز محددة ، يمكن استخراج دون إضافة مثبطات الأنزيم البروتيني أو مثبطات الفوسفاتيز ، وإيلاء الاهتمام إلى عملية الاستخراج للحفاظ على درجة حرارة منخفضة ، وتقصير وقت الطرد المركزي .
في لطخة غربية ، بيتا أكتين ، gapdh و توبولين يمكن اختيارها .
سرعة الطرد المركزي الطرد المركزي قوة نسبية ( RCF ، س ز ) و ( دورة في الدقيقة ، ص / دقيقة ) طريقتين للتعبير عن بعض أجهزة الطرد المركزي الطرد المركزي مع دورة في الدقيقة و س ز عرض التبديل ، ولكن بعض أجهزة الطرد المركزي لا التبديل التلقائي وظيفة . الصيغة التالية يجب أن تستخدم لتحويل : ز = ص × 1.118 × 10-5 × rpm2 ( ص = 10 × 1.118 × 10-5 × 30002 ) = 10 × 1.118 × 10-5 × 30002 = 1006.2 ( × ز ) على سبيل المثال : سرعة دوران 3000rpm ، فعالة قطرها 10 سم ) .
طريقة الاستخدام
استخراج البروتين الكلي من عينة الخلية :
تعليق خلية استخراج البروتين :
1 . إعداد استخراج :
كل 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج الباردة ، 2 ميكرولتر من مثبطات الأنزيم البروتيني و 2 ميكرولتر من مثبطات الفوسفاتيز تضاف إلى الخليط ، ثم يخلط جيدا و يوضع على الجليد .
2 - 5 × 106 خلايا الطرد المركزي في 4 ℃ 2500 × ز لمدة 5 دقائق ، بعناية استيعاب الثقافة المتوسطة ، قدر الإمكان ، الجافة ، وجمع الخلايا .
3 - غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني بارد ، وتجفيف طاف ممكن بعد كل غسل .
كل 5 × 106-1 × 107 خلايا ( حوالي 50 ملغ / 50 μ ل خلية حجم الترسيب ) إضافة 500 μ ل الباردة مجموع استخراج البروتين ، تهب ، والخلط ، التذبذب في 4 ℃ لمدة 20-30 دقيقة ، حتى الخلية تماما تقسيم ، لا خلية واضحة هطول .
5 - الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 4 ℃ 12000 × ز .
6 - مجموع البروتين يمكن الحصول عليها عن طريق استنشاق طاف في آخر precooling نظيفة أنبوب الطرد المركزي .
7 - كمية من البروتين المستخرج في الثلاجة - 80 ℃ التخزين أو استخدامها مباشرة في المصب التجربة .
استخراج البروتين من الخلايا الملتصقة :
1 . إعداد استخراج :
كل 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج الباردة ، 2 ميكرولتر من مثبطات الأنزيم البروتيني و 2 ميكرولتر من مثبطات الفوسفاتيز تضاف إلى الخليط ، ثم يخلط جيدا و يوضع على الجليد .
2 . بعناية استيعاب الثقافة المتوسطة من الخلايا الملتصقة .
3 - غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بارد مرتين ، وتجفيف برنامج تلفزيوني ممكن بعد كل غسل .
4 - إضافة كمية مناسبة من البروتين الكلي استخراج الباردة ، تتأرجح لمدة 15-30 دقيقة ، حتى يتم تقسيم الخلايا بشكل كامل ، كشط مرة أخرى مع خلية مكشطة ، تمتص في آخر أنبوب الطرد المركزي .
5 - الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 4 ℃ 12000 × ز .
6 - امتصاص طاف في آخر precooled نظيفة أنبوب الطرد المركزي للحصول على البروتين الكلي .
7 - كمية من البروتين المستخرج في الثلاجة - 80 ℃ التخزين أو استخدامها مباشرة في المصب التجربة .
استخراج البروتين الكلي من عينات الأنسجة :
1 . إعداد استخراج :
كل 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج الباردة ، 2 ميكرولتر من مثبطات الأنزيم البروتيني و 2 ميكرولتر من مثبطات الفوسفاتيز تضاف إلى الخليط ، ثم يخلط جيدا و يوضع على الجليد .
2 . 50-100 ملغ من عينات الأنسجة التي تم غسلها مع برنامج تلفزيوني ، ثم قطع إلى قطع صغيرة قدر الإمكان ، إضافة 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج ، باستخدام خليط الأنسجة / آلة المجانسة المجانسة حتى لا مرئية للعين المجردة الصلبة .
3 - امتصاص خليط من الأنسجة في precooled نظيفة أنبوب الطرد المركزي ، التذبذب لمدة 10-20 دقيقة في 4 ℃ . . . . . . .
4 - الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 4 ℃ 10000-14000 × ز .
5 - امتصاص طاف في آخر precooled نظيفة أنبوب الطرد المركزي للحصول على البروتين الكلي .
6 - كمية من البروتين المستخرج في الثلاجة - 80 ℃ التخزين أو استخدامها مباشرة في المصب التجربة .
تعليق خلية استخراج البروتين :
1 . إعداد استخراج :
كل 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج الباردة ، 2 ميكرولتر من مثبطات الأنزيم البروتيني و 2 ميكرولتر من مثبطات الفوسفاتيز تضاف إلى الخليط ، ثم يخلط جيدا و يوضع على الجليد .
2 - 5 × 106 خلايا الطرد المركزي في 4 ℃ 2500 × ز لمدة 5 دقائق ، بعناية استيعاب الثقافة المتوسطة ، قدر الإمكان ، الجافة ، وجمع الخلايا .
3 - غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني بارد ، وتجفيف طاف ممكن بعد كل غسل .
كل 5 × 106-1 × 107 خلايا ( حوالي 50 ملغ / 50 μ ل خلية حجم الترسيب ) إضافة 500 μ ل الباردة مجموع استخراج البروتين ، تهب ، والخلط ، التذبذب في 4 ℃ لمدة 20-30 دقيقة ، حتى الخلية تماما تقسيم ، لا خلية واضحة هطول .
5 - الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 4 ℃ 12000 × ز .
6 - مجموع البروتين يمكن الحصول عليها عن طريق استنشاق طاف في آخر precooling نظيفة أنبوب الطرد المركزي .
7 - كمية من البروتين المستخرج في الثلاجة - 80 ℃ التخزين أو استخدامها مباشرة في المصب التجربة .
استخراج البروتين من الخلايا الملتصقة :
1 . إعداد استخراج :
كل 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج الباردة ، 2 ميكرولتر من مثبطات الأنزيم البروتيني و 2 ميكرولتر من مثبطات الفوسفاتيز تضاف إلى الخليط ، ثم يخلط جيدا و يوضع على الجليد .
2 . بعناية استيعاب الثقافة المتوسطة من الخلايا الملتصقة .
3 - غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بارد مرتين ، وتجفيف برنامج تلفزيوني ممكن بعد كل غسل .
4 - إضافة كمية مناسبة من البروتين الكلي استخراج الباردة ، تتأرجح لمدة 15-30 دقيقة ، حتى يتم تقسيم الخلايا بشكل كامل ، كشط مرة أخرى مع خلية مكشطة ، تمتص في آخر أنبوب الطرد المركزي .
5 - الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 4 ℃ 12000 × ز .
6 - امتصاص طاف في آخر precooled نظيفة أنبوب الطرد المركزي للحصول على البروتين الكلي .
7 - كمية من البروتين المستخرج في الثلاجة - 80 ℃ التخزين أو استخدامها مباشرة في المصب التجربة .
استخراج البروتين الكلي من عينات الأنسجة :
1 . إعداد استخراج :
كل 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج الباردة ، 2 ميكرولتر من مثبطات الأنزيم البروتيني و 2 ميكرولتر من مثبطات الفوسفاتيز تضاف إلى الخليط ، ثم يخلط جيدا و يوضع على الجليد .
2 . 50-100 ملغ من عينات الأنسجة التي تم غسلها مع برنامج تلفزيوني ، ثم قطع إلى قطع صغيرة قدر الإمكان ، إضافة 500 ميكرولتر من البروتين الكلي استخراج ، باستخدام خليط الأنسجة / آلة المجانسة المجانسة حتى لا مرئية للعين المجردة الصلبة .
3 - امتصاص خليط من الأنسجة في precooled نظيفة أنبوب الطرد المركزي ، التذبذب لمدة 10-20 دقيقة في 4 ℃ . . . . . . .
4 - الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 4 ℃ 10000-14000 × ز .
5 - امتصاص طاف في آخر precooled نظيفة أنبوب الطرد المركزي للحصول على البروتين الكلي .
6 - كمية من البروتين المستخرج في الثلاجة - 80 ℃ التخزين أو استخدامها مباشرة في المصب التجربة .
تحليل المشاكل المشتركة
1 . انخفاض تركيز البروتين ؟
قد لا يكون هناك انقسام في بعض عينات الأنسجة المعالجة ، مما يؤدي إلى انخفاض تركيز البروتين . طالما أن العلاج المناسب وقت كاشف يمكن تمديدها . في ظل حالة من التذبذب المستمر ، أي مذبذب يمكن أن تكون مفصولة بضع دقائق مع شفط ضربة المزيج .
2 - بطء معدل انقسام الخلايا ؟
من أجل ضمان نشاط البروتين المستخرج تماما ، واقية من البروتين الصيغة المستخدمة في استخراج السائل لديها مزايا خفيفة القدرة على تكسير ، واسعة النطاق التطبيق في المصب . إطالة وقت تكسير بشكل صحيح .
3 - ما هي الأساليب المستخدمة لتحديد البروتين ؟
BCA الأسلوب الموصى به . برادفورد الأسلوب غير مناسب لأن كاشف يحتوي على المكونات التي تتداخل مع برادفورد الأسلوب . إذا كان غسيل الكلى قد تم القيام به ، أو إذا كان نظام التخزين المؤقت قد تغيرت مع تحلية المياه العمود ، برادفورد طريقة يمكن استخدامها لتحديد الكمية .
4 . هلام هطول يحدث أثناء استخراج ؟
كمية صغيرة من مادة هلامية شفافة يمكن أن تحدث في بعض الأحيان في استخراج البروتين المنتج ، الذي هو ظاهرة طبيعية . هلام شفاف هو مركب يحتوي على الحمض النووي الجينوم أو ما شابه ذلك . في حالة عدم الكشف عن البروتينات الخاصة التي تربط بشكل وثيق مع الحمض النووي الجينوم ، supernatants يمكن مباشرة الطرد المركزي لإجراء التجارب اللاحقة . إذا كان هناك حاجة إلى الكشف عن البروتينات التي تربط بشكل وثيق مع الجينوم ، ثم يمكن معالجتها بواسطة الموجات فوق الصوتية ، 300W / 10 ثانية بين 10 ثوان ، بالموجات فوق الصوتية لمدة 3 دقائق ، ثم الطرد المركزي طاف لاستخدامها في التجارب اللاحقة . الموجات فوق الصوتية لا يلزم الكشف عن بعض عوامل النسخ المشتركة ، مثل NF - كابا باء ، البروتين p53 ، الخ .
5 - استخراج البروتين النشط ؟
كاشف عدة لا تحتوي على عنصر الأيونية المنظفات ، لا ضرر في هيكل البروتين ، لا ضرر في التفاعل بين البروتينات ، البروتين يحافظ على التشكل الطبيعي والنشاط .
قد لا يكون هناك انقسام في بعض عينات الأنسجة المعالجة ، مما يؤدي إلى انخفاض تركيز البروتين . طالما أن العلاج المناسب وقت كاشف يمكن تمديدها . في ظل حالة من التذبذب المستمر ، أي مذبذب يمكن أن تكون مفصولة بضع دقائق مع شفط ضربة المزيج .
2 - بطء معدل انقسام الخلايا ؟
من أجل ضمان نشاط البروتين المستخرج تماما ، واقية من البروتين الصيغة المستخدمة في استخراج السائل لديها مزايا خفيفة القدرة على تكسير ، واسعة النطاق التطبيق في المصب . إطالة وقت تكسير بشكل صحيح .
3 - ما هي الأساليب المستخدمة لتحديد البروتين ؟
BCA الأسلوب الموصى به . برادفورد الأسلوب غير مناسب لأن كاشف يحتوي على المكونات التي تتداخل مع برادفورد الأسلوب . إذا كان غسيل الكلى قد تم القيام به ، أو إذا كان نظام التخزين المؤقت قد تغيرت مع تحلية المياه العمود ، برادفورد طريقة يمكن استخدامها لتحديد الكمية .
4 . هلام هطول يحدث أثناء استخراج ؟
كمية صغيرة من مادة هلامية شفافة يمكن أن تحدث في بعض الأحيان في استخراج البروتين المنتج ، الذي هو ظاهرة طبيعية . هلام شفاف هو مركب يحتوي على الحمض النووي الجينوم أو ما شابه ذلك . في حالة عدم الكشف عن البروتينات الخاصة التي تربط بشكل وثيق مع الحمض النووي الجينوم ، supernatants يمكن مباشرة الطرد المركزي لإجراء التجارب اللاحقة . إذا كان هناك حاجة إلى الكشف عن البروتينات التي تربط بشكل وثيق مع الجينوم ، ثم يمكن معالجتها بواسطة الموجات فوق الصوتية ، 300W / 10 ثانية بين 10 ثوان ، بالموجات فوق الصوتية لمدة 3 دقائق ، ثم الطرد المركزي طاف لاستخدامها في التجارب اللاحقة . الموجات فوق الصوتية لا يلزم الكشف عن بعض عوامل النسخ المشتركة ، مثل NF - كابا باء ، البروتين p53 ، الخ .
5 - استخراج البروتين النشط ؟
كاشف عدة لا تحتوي على عنصر الأيونية المنظفات ، لا ضرر في هيكل البروتين ، لا ضرر في التفاعل بين البروتينات ، البروتين يحافظ على التشكل الطبيعي والنشاط .
