cck-8 إليسا كيت ( انتشار الخلايا و اختبار السمية )

خلية العد كيت - 8 ( cck-8 ) هو طريقة بديلة MTT الأسلوب ، الذي يقوم على ( للذوبان في الماء tetrazole الملح ، الاسم الكيميائي : 2 - ( 2-methoxy-4-nitrophenyl ) - ( 3-4-nitrophenyl ) - 5 - ( 2 , 4-disulfonylbenzene ) - 2h-tetrazole monosodium الملح ) . اختراع يمكن استخدامها لفحص المخدرات ، وتكاثر الخلايا اختبار ، اختبار السمية ، اختبار حساسية العقاقير الورم ، الخ .

تعليمات الاستخدام :
جعل منحنى القياسية ( عند قياس كمية محددة من الخلايا )
1 ، عدد الخلايا في تعليق خلية أعدت عد لوحة ، ثم تلقيح الخلايا .
2 ، في المقابل ، مع نسبة متساوية من تمييع الثقافة المتوسطة في تركيز الخلية التدرج ، عموما 3-5 تركيز الخلية التدرج ، كل مجموعة من 3-6 المسام .
3 ، بعد التلقيح ، مثقف على جدار الخلية ، ثم إضافة cck-8 كاشف الثقافة لبعض الوقت لتحديد قيمة التطوير التنظيمي ، مما يجعل عدد الخلايا الإحداثي السيني ( المحور السيني ) ، التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي ( المحور Y ) منحنى القياسية . على أساس هذا المنحنى القياسي ، وعدد من الخلايا غير معروف يمكن قياسها ( فرضية اختبار المنحنى القياسي هو أن الظروف التجريبية يجب أن تكون متسقة ، من السهل تحديد عدد الخلايا المزروعة و بعد إضافة cck-8 الثقافة مرة . و

الكشف عن نشاط الخلايا

1 - تعليق خلية ( 100 ميكروغرام / لتر ) تم تلقيح في 96 مسام لوحة . الثقافة كانت لوحات قبل مثقف في حاضنة ( 37 ℃ ، 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون ) .

2 ، إضافة 10 ميكروغرام ل cck-8 الحل في كل حفرة ( الحرص على عدم تشكيل فقاعة في حفرة ، وسوف تؤثر على قراءة قيمة التطوير التنظيمي ) .

3 - احتضان الثقافة لوحة في حاضنة لمدة 1-4 ساعات .

4 - الامتصاصية في 450nm يحدده enzymogram . . . . . . .

5 ، إذا كانت قيمة التطوير التنظيمي ليست مصممة مؤقتا ، ثم بعد التصميم ، يمكن إضافة 10 ميكروغرام ل 0.1m حمض الهيدروكلوريك أو 1 ٪ من الحزب الديمقراطي الصربي ( ث / ت ) الحل في كل مسام ، وتغطي لوحة الثقافة لتجنب الضوء للحفاظ على درجة حرارة الغرفة . الامتصاصية لن تتغير في غضون 24 ساعة .

انتشار الخلايا - اختبار السمية

1 - 100 ميكروغرام ل تعليق خلية في 96 مسام لوحة . لوحة الثقافة كانت تزرع في حاضنة لمدة 24 ساعة ( 37 ℃ ، 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون ) .

2 - إضافة 10 ميكروغرام ل تركيزات مختلفة من المواد في الثقافة لوحة . الحضانة في حاضنة لمدة مناسبة ( على سبيل المثال ، 6 ، 12 ، 24 أو 48 ساعة ) .

3 ، إضافة 10 ميكروغرام ل cck-8 الحل في كل حفرة ( الحرص على عدم تشكيل فقاعة في حفرة ، وسوف تؤثر على قراءة قيمة التطوير التنظيمي ) . إذا كان اختبار المواد المؤكسدة أو مختزلة ، متوسطة جديدة يمكن استبدالها قبل إضافة cck-8 ( إزالة متوسطة ، وغسل الخلايا مرتين مع متوسطة ، ثم إضافة جديدة متوسطة ) لإزالة آثار المخدرات .

4 - احتضان الثقافة لوحة في حاضنة لمدة 1-4 ساعات .

5 - الامتصاصية في 450nm يحدده enzymic التسمية .

6 ، إذا كانت قيمة التطوير التنظيمي لا تقاس مؤقتا ، ثم بعد التصميم ، يمكن إضافة 10 ميكروغرام ل 0.1m حمض الهيدروكلوريك أو 1 ٪ من الحزب الديمقراطي الصربي ( ث / ت ) الحل في كل حفرة ، وتغطي لوحة الثقافة لتجنب الضوء في درجة حرارة الغرفة . الامتصاصية لن تتغير في غضون 24 ساعة .

حساب النشاط

نشاط الخلايا ( % ) = ( أ ) ( إضافة ) - أ ( فارغة ) / ( 0 إضافة ) - أ ( فارغة ) × 100

( الجرعات ) : الامتصاصية من المسام مع الخلايا ، cck-8 الحلول و الحلول الصيدلانية

أ ( فارغة ) : الامتصاصية من مسام الخلية مع الثقافة المتوسطة و cck-8 الحل دون

أ ( 0 ) : الامتصاصية مع الخلية ، cck-8 الحل دون المسام من الحل .

النشاط : نشاط تكاثر الخلايا أو السمسة

ملاحظة :

ويقترح أن عدد الخلايا المزروعة و وقت الثقافة بعد إضافة cck-8 كاشف ينبغي تحسس من خلال عدة ثقوب .

خلايا الدم البيضاء قد تحتاج إلى أن تكون مثقف لفترة أطول .

③ عند استخدام معيار 96 فتحة لوحة ، الحد الأدنى من كمية التطعيم من الخلايا الملتصقة على الأقل 1 ، 000 / المسام ( 100 ميكروغرام ل متوسطة ) . حساسية الكشف عن الكريات البيض منخفضة نسبيا ، وبالتالي فإن المبلغ الموصى به من التطعيم لا يقل عن 2 ، 500 / المسام ( 100 ميكروغرام ل متوسطة ) . إذا كنت ترغب في استخدام 24 أو 6-porous لوحة لوحة التجربة ، حساب كمية التطعيم في كل مسام و إضافة cck-8 الحل حسب 10 ٪ من إجمالي حجم المسام متوسطة .

إذا لم يكن هناك 450nm مرشح ، مرشح مع الامتصاصية بين 430-490 نانومتر يمكن استخدامها ، ولكن حساسية الكشف عن 450nm هو أعلى .

امتصاص الفينول الأحمر في الثقافة المتوسطة يمكن القضاء عليها عن طريق خصم امتصاص الخلفية في حفرة فارغة ، وبالتالي لا تؤثر على الكشف .