الأبقار الصفيحات المشتقة من عامل النمو ، PDGF إليسا كيت

الأبقار الصفيحات المشتقة من عامل النمو ، PDGF إليسا كيت

الحفاظ على حالة صالحة

1 . الحفاظ على عدة : 2-8 ℃ . . . . . . .

2 - مدة الصلاحية : 6 أشهر

مبدأ التجربة

الأبقار الصفيحات المشتقة من عامل النمو ( PDGF ) تم الكشف عنها من قبل اثنين من الأجسام المضادة ساندويتش الأسلوب . تنقية الأبقار الصفيحات المشتقة من عامل النمو ( PDGF ) الأجسام المضادة هي المغلفة مع لوحة microporous لإعداد الأجسام المضادة الصلبة ، الصفائح الدموية عامل نمو مشتق ( PDGF ) تضاف إلى micropore المغلفة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة في التسلسل ، ثم جنبا إلى جنب مع HRP المسمى الصفيحات المشتقة من عامل النمو ( PDGF ) الأجسام المضادة على شكل antibody-antigen-enzymic المسمى مجمع الأجسام المضادة ، ثم الركيزة TMB تضاف بعد الغسيل . TMB هو تحويلها إلى اللون الأزرق من خلال تحفيز HRP الانزيم ، وأخيرا إلى اللون الأصفر من خلال عمل حمض . هناك علاقة طردية بين عمق اللون و الصفائح الدموية عامل نمو مشتق ( PDGF ) في العينة . الامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) تم قياس قيمة في 450nm بواسطة انزيم مرتبط المناعي فحص ( ELISA ) وتركيز الأبقار الصفيحات المشتقة من عامل النمو ( PDGF ) تم حسابها من خلال منحنى القياسية .

تكوين عدة

130 مرة تركيز سائل الغسيلزجاجة7إنهاء السائلزجاجة

2انزيم الكواشف القياسيةزجاجة8معيار المنتج ( 320 نانوغرام / لتر )0.5ml * 1 زجاجة

3enzymic المغلفة لوحةالمادة 129معيار تخفيف1.5ml * 1 زجاجة

4عينة مخففزجاجة10دليل التعليماتنسخة

5المطور السائلزجاجة11لوحة ختم الفيلمصور

6المطور ب السائلزجاجة12ختم حقيبةص

خطوات التشغيل

1.تمييع القياسية : هذه المجموعة توفر واحدة من الأصل مرات القياسية ، والتي يمكن أن تكون مخففة في أنبوب اختبار صغير على النحو المبين أدناه .

160 نانغ / لترالمعيار رقم 5إضافة 150 ميكرولتر تمييع القياسية

80 نانغ / لترالمعيار رقم 4إضافة 150 ميكرولتر من محلول مخفف القياسية رقم 5

40 نانغ / لترالمعيار رقم 3إضافة 150 ميكرولتر القياسية المخفف

20 نانغ / لترالمعيار رقم 2إضافة 150 ميكرولتر من محلول مخفف القياسية رقم 3

10 نانغ / لترالمعيار رقم 1إضافة 150 μ ل تمييع حل القياسية رقم 2

2.إضافة عينة : حفرة فارغة ( أي عينة أو انزيم الكواشف القياسية في السيطرة على حفرة ، نفس العملية في كل خطوة أخرى ) ، معيار حفرة ، حفرة عينة لفحصها . عينة مخففة 40 ميكرولتر أضيفت إلى عينة ثقب ، ثم 10 ميكرولتر أضيفت إلى عينة ( النهائي تخفيف درجة العينة 5 مرات ) . إضافة عينة إلى الجزء السفلي من لوحة ثقب ، لا تلمس جدار الحفرة قدر الإمكان ، يهز بلطف ويخلط جيدا .

3.درجة الحرارة : بعد استخدام لوحة الختم ، ختم لوحة في 37 ℃ لمدة 30 دقيقة .

4.السائل : 30 مرة تركيز محلول الغسيل المخفف مع الماء المقطر 30 مرة احتياطية

5.غسل : إزالة بعناية ختم الفيلم ، والتخلص من السائل ، الجافة ، كل حفرة مليئة سائل الغسيل ، لا تزال قائمة بعد 30 ثانية من التخلص منها ، كرر ذلك 5 مرات ، بات الجافة .

6.إضافة الإنزيم : إضافة 50 ميكرولتر من الانزيم المسمى كاشف في كل حفرة ، ما عدا فارغة حفرة .

7.ون يو : نفس العملية 3 .

8.غسل : نفس العملية 5 .

9.اللون : لون المطور A50 ميكرولتر تضاف إلى كل حفرة ، ثم المطور B50 ميكرولتر تضاف إلى كل حفرة .

10.إنهاء : إضافة 50 ميكرولتر من إنهاء الحل في كل حفرة ، إنهاء رد الفعل ( في هذا الوقت الأزرق يتحول الأصفر ) .

11.التصميم : قياس الامتصاصية ( التطوير التنظيمي ) من كل ثقب في سلسلة من الطول الموجي 450nm فارغة مع ثقب . التصميم يجب أن تتم في غضون 15 دقيقة بعد إنهاء السائل المضافة .

حساب

مع تركيز المواد القياسية الإحداثي السيني و التطوير التنظيمي قيمة الإحداثي الطولي ، منحنى القياسية هي مرسومة على تنسيق ورقة . مضروبة في تخفيف متعددة ؛ أو معادلة الانحدار الخطي من المنحنى القياسي يمكن حسابها باستخدام تركيز المواد المرجعية و التطوير التنظيمي قيمة ، و التطوير التنظيمي قيمة العينة يمكن استبدالها في المعادلة ، و تركيز العينة يمكن حسابها ، والتي يمكن أن تكون مضروبة في تخفيف متعددة .

الاحتياطات

1 . إزالة عدة من البيئة المبردة يجب أن تكون متوازنة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-30 دقيقة قبل استخدامها ، إذا كان الانزيم هو حزمة مفتوحة بعد لوحة ، لوحة يجب أن تكون معبأة في حقيبة مختومة للحفاظ عليها .

2 - تركيز سائل الغسيل قد تبلور هطول الأمطار ، تمييع في حمام الماء يمكن أن تكون ساخنة للمساعدة في حل ، لا تؤثر على نتائج الغسيل .

3 - ينبغي استخدام العينات في كل خطوة ، ودقة ينبغي أن يكون دائما تصحيح لتجنب الخطأ في الاختبار . عينة واحدة إضافة الوقت ينبغي أن تسيطر عليها في غضون 5 دقائق ، إذا كان عدد كبير من العينات ، فمن المستحسن استخدام بندقية بالإضافة إلى عينة .

4 . يرجى القيام منحنى القياسية في وقت واحد في كل مرة ، ويفضل أن يكون ذلك من خلال ثقب مزدوج . إذا كان محتوى المواد التي سيتم الكشف عنها في العينة عالية جدا ( قيمة التطوير التنظيمي من العينة أكبر من قيمة التطوير التنظيمي من أول حفرة من عينة القياسية ) ، يرجى استخدام عينة مخفف تمييع عدة مرات ( ن مرات ) قبل تحديد ، يرجى حساب آخر مضروبة في مجموع تخفيف متعددة ( × ن × 5 ) .

5 . ختم الفيلم يقتصر على استخدام لمرة واحدة لتجنب التلوث الصليب .

6 . الحفاظ على الركيزة من الضوء .

7 - تعمل بدقة وفقا للتعليمات ، نتائج الاختبار يجب أن يكون الحكم على أساس قراءة الأنزيمية الصك .

8 - جميع العينات ، سوائل الغسيل ، وجميع أنواع النفايات يجب أن تعامل على أنها معدية .

9 .الأبقار الصفيحات المشتقة من عامل النمو ، PDGF إليسا كيتلا يجوز خلط المكونات مع دفعات مختلفة .