عكر ( الماوس خلايا سرطان المريء )

عكر ( الماوس خلايا سرطان المريء )

بعد تلقي العلاج الخلوي

1 ) بعد تلقي الخلايا ، 75 ٪ من الكحول زجاجة تعقيم الجدار سوف توضع في درجة حرارة الغرفة T25 زجاجة حوالي 1 ساعة ، إذا وجدت أن الثقافة زجاجة مكسورة ، تسرب السائل ، وتلوث الخلايا ، يرجى الاتصال بنا في الوقت المناسب بعد التقاط الصور .

2 ) يرجى التأكد من حالة الخلية تحت المجهر 4 أو 5 س ، وفي الوقت نفسه التقاط الصور من الخلايا التي تم تلقيها حديثا ( 10 × 20 × 2-3 ) على التوالي ، والحفاظ على صورة من ظهور ثقافة زجاجة ، كأساس للحصول على حالة الخلية بعد البيع .

3 ) الخلايا الملتصقة :الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة ، نمو الخلايا و الالتصاق لوحظ تحت المجهر ، وبعض الخلايا الملتصقة سوف تسقط من الاهتزاز في عملية النقل السريع و تصبح مستعمرة .إذا كانت كثافة نمو الخلايا أقل من 60 ٪ ، متوسطة الثقافة يمكن إزالتها ( إذا كانت الخلايا غير ملتصقة تحتاج إلى إعادة تدويرها بواسطة الطرد المركزي ، ثم علقت في الثقافة الأصلية زجاجة ) و 6-8 مل من الثقافة المتوسطة التي تم إعدادها حديثا يمكن أن تضاف إلى الثقافة خلية مربع . إذا كان نمو الخلايا كثافة تصل إلى 70 ٪ - 80 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور العلاج . إذا كانت الخلايا التي فقدت بسبب الاهتزاز النقل تحتاج إلى إعادة تدويرها بواسطة الطرد المركزي .

4 ) طريقة عملية تقشير الخلايا أثناء النقل : الطرد المركزي جمع الخلايا المتساقطة بعد التخلص من طاف ، وغسلها مع برنامج تلفزيوني مرة واحدة ، الطرد المركزي التخلص من طاف ، أنبوب الطرد المركزي إضافة 1 مل يي الانزيم في مهب الهضم حوالي 20 ثانية ، بالإضافة إلى اللعب مع كامل وسائل الإعلام لإنهاء الهضم الطرد المركزي إعادة تمهيد ، ما تبقى من الخلايا الملتصقة تعمل وفق طريقة طبيعية خلية ملتصقة الثقافة .

5 ) ملاحظة : وسائل الإعلام المستخدمة في النقل ( الري ) لا يمكن أن تستخدم في زراعة الخلايا ، يرجى تغيير وفقا لتوجيهات من خلية ثقافة الشروط الجديدة التي أعدتها وسائل الإعلام تلعب ثقافة الخلية . بعد الحصول على الخلايا ، أول مرور اقترح T25 قارورة الثقافة 1 : 2 مرور .

عملية زراعة الخلايا

1 ) إحياء الخلايا : الخلايا التالية هي ثقافة بالتبريد فقط للرجوع اليها ، خطوات عملية محددة هي أساسا مع تعليمات المنتج

تجميد الأنابيب التي تحتوي على 1 مل من تعليق خلية هزت وذوبان بسرعة في حمام مائي في 37 ℃ و 4 مل متوسطة الثقافة كانت مختلطة بالتساوي . بعد الطرد المركزي لمدة 3 دقائق في 1000 دورة في الدقيقة ، supernatants تم التخلص منها ، و 1-2 مل متوسطة الثقافة أضيفت ، ثم تهب بالتساوي . ثم كل تعليق خلية أضيفت إلى قارورة تحتوي على كمية مناسبة من متوسطة الثقافة بين عشية وضحاها ( أو تعليق خلية أضيفت إلى طبق بتري 6 سم ، إضافة حوالي 4 مل للعب كامل متوسطة الثقافة بين عشية وضحاها ) . تغيير السوائل في اليوم الثالث و فحص كثافة الخلية .

2 ) مرور الخلية : إذا كانت كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور الثقافة .

أ ) التخلص من الثقافة طاف ، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني بدون أيونات الكالسيوم والمغنيسيوم 1-2 مرات .

( ب ) إضافة 1 مل من السائل الهضمي ( 0.25 في المائة trypsin-0.02 تا ) في قارورة الثقافة ، وجعل السائل الهضمي تتسرب إلى جميع الخلايا ، وضع قارورة الثقافة في 37 ℃ لمدة 1-3min ( اعتمادا على حالة الهضم الخلوي ) ، ثم لاحظ تحت المجهر الهضم الخلوي ، إذا كان معظم الخلايا تصبح مستديرة و تقشر ، تأخذ مرة أخرى إلى طاولة العمليات بسرعة ، اضغط على قارورة الثقافة بضع مرات ، ثم إضافة 2-3ml للعب كامل المتوسطة لإنهاء عملية الهضم .

ج ) خفقت بلطف ، ثم وضعها في أنبوب الطرد المركزي العقيم ، الطرد المركزي 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق ، تجاهل طاف ، إضافة 1-2 مل متوسطة الثقافة ، ثم تهب بالتساوي .

د ) وضع تعليق خلية في وعاء جديد أو زجاجة جديدة تحتوي على 8 مل متوسطة الثقافة في نسبة 1 : 2 و الثقافة في حاضنة .

ملاحظة مرور الخلايا الملتصقة :

ل تأكد من برنامج تلفزيوني يغسل مرة أخرى .

ل - مراقبة الخلايا عدة مرات لإتقان الوقت ، لا تتوقف عن هضم الخلايا دون أن تفقد أساسا ثم ضربة أسفل ، مما يجعل الخلايا أكثر عرضة للتمايز والموت .

لا تهب على الخلايا في كل وقت .

3 ) الحفاظ على الخلايا : عندما تكون الخلايا في حالة جيدة من النمو ، يمكن الحفاظ على الخلايا بالتبريد . أدناه زجاجة T25 على سبيل المثال؛

( أ ) جمع الخلايا والخلايا متوسطة الثقافة ، ووضعها في أنبوب الطرد المركزي العقيم ، الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 4 دقائق ، والتخلص من طاف ، وغسلها مع برنامج تلفزيوني ، والتخلص من برنامج تلفزيوني ، عد الخلايا .

( ب ) إضافة المصل خالية من الخلايا حسب عدد الخلايا ، مما يجعل كثافة الخلية 1 × 10 ^ ^ 6 ~ 1 × 10 7 / مل ، بلطف مزيج 1 مل تعليق خلية في كل تجميد أنبوب ، لاحظ أن تجميد أنبوب جعل علامة .

ج ) وضع أنبوب في الثلاجة - 80 درجة مئوية ، 24 ساعة في وقت لاحق في النيتروجين السائل ملء التخزين . سجل موقع التخزين البارد في المرة القادمة .

رابعاً - اعتبارات التدريب

1 ) الخلايا التي تعاني من مشاكل في حالة إعادة الإرسال

( أ ) المشاكل التي واجهتها الخلية أثناء النقل ، بما في ذلك فقدان الخلية ، تلف الزجاجة ، تسرب شديد من الثقافة المتوسطة ، وما إلى ذلك ؛

( ب ) مشكلة التلوث الخلوي ، يرجى تقديم نتائج التجارب الحقيقية لنا في غضون 3 أيام من استلام المنتج ، ثم إعادة إرسالها بعد التحقق .

( ج ) بعد 2 ساعة من التخزين البارد في درجة حرارة الغرفة ، بعد 2 أيام من الانتعاش ، فإن الغالبية العظمى من الخلايا لا البقاء على قيد الحياة ( يجب أن توفر صورة واضحة عن حالة الخلية ) ، إعادة الإرسال ؛

( د ) بعد يومين من إنعاش الخلايا المشحونة بواسطة الثلج الجاف أو في درجة حرارة الغرفة ، ظلت الخلايا المشحونة في مكانها لمدة 2 أيام ولم تفتح بعد ، مما أدى إلى حدوث تلوث وإعادة الإرسال؛

( هـ ) مسألة نشاط الخلايا ، يرجى تقديم نتائج حقيقية في غضون 7 أيام من استلام المنتج ، وذلك باستخدام التريبان الأزرق تلطيخ لتحديد نشاط الخلايا ، وصور يومية من الخلايا ، والتحقق من إعادة إرسالها .

و ) في اليوم الذي تتلقى الخلايا ، 2 ، 3 أيام ، يرجى التقاط الصور ، 3 أيام لم أبلغ ، يعتبر المنتج المؤهلين . إذا كان هناك أي مشكلة في غضون 4-7 أيام ، يرجى تقديم صور من 3 أيام قبل استلام الخلايا ، صور من مشاكل في الخلايا ، فضلا عن تفاصيل الخطوات العملية ذات الصلة من الخلايا .

2 ) حالة الخلية التي تعاني من مشاكل وعدم تكرارها

( أ ) التلوث الخلوي الناجم عن عمليات العميل وعدم تكراره؛

( ب ) سوء حالة الخلية وعدم تكرارها بسبب أخطاء تشغيلية خطيرة من جانب العميل؛

( ج ) حالة الخلية ليست جيدة و لا تتكرر إذا لم نوصي خلية ثقافة النظام ؛

د ) حالة الخلية ليست جيدة ، لا توفر صورة واضحة عن حالة الخلية قبل 3 أيام من الثقافة ، لا إعادة الإرسال ؛

( هـ ) لا تتكرر في حالة وجود مشاكل في الخلايا التي تسببها العلاجات الأخرى أثناء زراعة الخلايا؛

( و ) تلقي دليل على وجود مشاكل في الزنزانة والاتصال بموظفي خدمة العملاء لمدة تزيد على 7 أيام ، دون إعادة الإرسال؛

( ز ) حسب الحالة .

خامساً - نقاط الاهتمام

1 - جميع الخلايا الحيوانية تعتبر خطرة بيولوجيا ، يجب أن تعمل في المرحلة الثانية من السلامة البيولوجية منصة . يرجى ملاحظة أن جميع النفايات السائلة والأواني التي تأتي في اتصال مع هذه الخلايا يجب أن تكون معقمة قبل التخلص منها .

2 - ينصح دائما استخدام القفازات الواقية ، والملابس الواقية أقنعة الوجه عند استعادة الخلايا المجمدة . ملاحظة : تجميد الأنابيب المغمورة في النيتروجين السائل سوف تتسرب ، وسوف ببطء ملء النيتروجين السائل . عندما يذوب النيتروجين السائل في مرحلة الغاز يمكن أن يؤدي إلى انفجار السفينة أو ضربة قبالة غطاء مع قوة خطيرة ، مما أدى إلى ارتفاع الحطام ، مما تسبب في أضرار بشرية .

3 . هذه الخلية هو البحث العلمي فقط ! تعليمات للرجوع اليها فقط مع وصول الفعلية تعليمات تسود !