الخلايا التي تم جمعها من قبل cryopreserved سريريا حل تقشير ، وعدد الخلايا التي تم عدها .
cp-1 خلية cryopreserved الحل ( السريرية الصف cryopreserved الحل )
・ الحصول على شهادة التأهيل من المواد والمنتجات مثل الطب التجديدي في اليابان
1 . المنتجات التي تم الترويج لها منذ عام 1992 .
2 - تصنيع معدات برنامج الرصد العالمي في اليابان
3 - إجراء التجارب السريرية .
5 . يمكن أن تكون مجمدة في الثلاجة - 80 ℃ . . . . . . .
6 - لا تحتوي على مكونات من أصل حيواني
7 - الشفافية في المكونات
8 - شهادة تسجيل المعهد الياباني ( وسط )

تطبيق المثال
طريقة تجميد تعليق خلية خلية ملتصقة

طريقة الحفظ بالتبريد / ذوبان الخلايا الجذعية المكونة للدم باستخدام cp-1hg

III。 طريقة الحفظ بالتبريد / تذويب الخلايا الجذعية الوسيطة مع cp-1hg
إعداد والحفاظ على السوائل المجمدة
· 1.cp-1 درجة عالية ، 25 ٪ هسا ، تبريد متوسطة إلى 4 ℃ . . . . . . .
· 2 - cp-1 6.8 مل ، 25 ٪ هسا 3-2 مل و 10 مل متوسطة الثقافة أضيفت إلى أنبوب الطرد المركزي ، مختلطة بالتساوي .
· 3 - قبل الاستخدام ، يرجى حفظها في 4 ℃ . . . . . . .
الحفاظ على الخلايا
1 - جمع الخلايا المجمدة مع تجريد الحل ، عد الخلايا .
الطرد المركزي إزالة طاف .
· 3 - إضافة cp-1 / 25 ٪ HSA / متوسطة ( إعداد cryopreserved-2 ) التي تم تبريده إلى 4 درجة مئوية قبل تعليق حتى 1 × 106 خلية / مل .
· 4 - وضع كل 1 مل في أنبوب تجميد ، تجميد الحاويات ، وتجميد ببطء في - 80 درجة مئوية .
· 5 - في اليوم التالي إلى النيتروجين السائل أو - 150 ℃ المبردات العميقة .
ذوبان الخلايا
· 1 - إعداد 9 مل متوسطة في أنبوب الطرد المركزي .
2 - إزالة أنبوب التبريد من النيتروجين السائل و تذوب بسرعة في حمام دافئ في 37 درجة مئوية .
· 3 - إضافة جميع الخلايا مذاب إلى متوسطة و الطرد المركزي .
· 4 - إزالة طاف وإضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة .
· 5 - الثقافة في أفضل الظروف لكل نوع من الخلايا المستخدمة .
نتائج التقييم الرابع ( الخلايا الجذعية الوسيطة بالتبريد )
الحفاظ على خلايا الجذع / وفاق مع cp-1hg وتقييم
Ⅰ.طريقة تجميد تعليق خلية خلية ملتصقة
ثانياً - CP-1®درجة عاليةبرد .جمدتحفظالحلجمدتالجذعية المكونة للدمدقيقنهج الخلويةثالثاً - CP-1®درجة عاليةتنطبق علىشحننوعيجاف .دقيقالباردة الخلويةجمدتحفظالحلجمدتحزبالقانون
إعداد والحفاظ على السوائل المجمدة
· 1.cp-1 درجة عالية ، 25 ٪ هسا ، تبريد متوسطة إلى 4 ℃ . . . . . . .
· 2 - cp-1 6.8 مل ، 25 ٪ هسا 3-2 مل و 10 مل متوسطة الثقافة أضيفت إلى أنبوب الطرد المركزي ، مختلطة بالتساوي .
· 3 - قبل الاستخدام ، يرجى حفظها في 4 ℃ . . . . . . .
الحفاظ على الخلايا
1 - جمع الخلايا المجمدة مع تجريد الحل ، عد الخلايا .
الطرد المركزي إزالة طاف .
· 3 - إضافة cp-1 درجة عالية / 25 ٪ هسا / متوسطة ( إعداد cryopreserved-2 ) التي تم تبريده إلى 4 درجة مئوية .
تعليق حتى 1 × 106 خلايا / مل .
· 4 - وضع كل 1 مل في أنبوب تجميد ، تجميد الحاويات ، وتجميد ببطء في - 80 درجة مئوية .
· 5 - في اليوم التالي إلى النيتروجين السائل أو - 150 ℃ المبردات العميقة .
ذوبان الخلايا
· 1 - إعداد 9 مل متوسطة في أنبوب الطرد المركزي .
2 - إزالة أنبوب التبريد من النيتروجين السائل و تذوب بسرعة في حمام دافئ في 37 درجة مئوية .
· 3 - إضافة جميع الخلايا مذاب إلى متوسطة و الطرد المركزي .
· 4 - إزالة طاف وإضافة كمية مناسبة من الثقافة المتوسطة .
· 5 - الثقافة في أفضل الظروف لكل نوع من الخلايا المستخدمة .
Ⅳ.تقييمالتكافؤعقدة .فاكهة )بينشحننوعيجاف .دقيقالباردة الخلويةجمدتحفظو
[ الهدف ] عن الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية ( hmscs ) التي من المتوقع أن تستخدم في الطب التجديدي في المستقبل ، يمكن أن تكون مجمدة في درجة عالية من cp-1 ويمكن نقلها بثبات على المدى الطويل من خلال رخيصة ومريحة الجليد الجاف ؟
[ طريقة ] الدهنية المشتقة من الخلايا الجذعية الوسيطة ( MSC - في ) أو نخاع العظام المستمدة من الخلايا الجذعية الوسيطة ( MSC - BM ) كانت مجمدة في cp-1high الصف أو السيطرة ( أ ) ( 1 × 106 خلية / مل ) و تخزينها في النيتروجين السائل للدبابات . بعد تخزينها في خزان النيتروجين السائل ، يجب التأكد من معدل الالتصاق إلى الأوعية الدموية ( معدل الالتصاق = عدد الخلايا الحية / عدد الخلايا الحية التي تم تلقيحها ) على افتراض نقل الثلج الجاف ( - 80 ° C · 7 أيام ، 60 ° C · 3 أيام ، 60 ° C · 7 أيام ) ، معدل البقاء على قيد الحياة مباشرة بعد الذوبان ، و معدل الالتصاق إلى الأوعية الدموية في كل حالة من ظروف الثقافة في اليوم التالي .
[ نتيجة ] معدل البقاء على قيد الحياة بعد ذوبان أكثر من 90 ٪ في جميع الظروف ، ولكن لم يلاحظ أي فرق ( الشكل باء ) . ومع ذلك ، في تجميد hmcs كمجموعة تحكم ، العديد من الخلايا الميتة لم يلتصق في حاضنة في اليوم التالي بعد ذوبان الجليد في - 60 درجة مئوية ، ولكن عدد قليل جدا من الخلايا الميتة شوهدت في تجميد hmcs في cp-1 ، وعدد قليل جدا من جميع الخلايا الميتة لوحظ . ربط الخلايا ( ب و ج أدناه ) .
[ ختام ] لأن درجة حرارة الجليد الجاف نفسه حوالي - 80 درجة مئوية ، ونحن نعتقد أن لجنة السلامة البحرية المجمدة في cp-1high الصف يمكن أن تكون مستقرة على المدى الطويل نقل الجليد الجاف .