نظام الألوان و حمام الماء دقة ريسورسينول اللونية

إن hydroxymethyl فورفورال مشتق من الفركتوز يتفاعل مع حمض الهيدروكينون قوية ، مما يدل على الكرز الأحمر . كاشف اللونية : 0.1 في المائة ريسورسينول الحل ( أعدت مع الكحول المطلق ) و 30 ٪ حمض الهيدروكلوريك تم إعدادها . العملية : 1 مل عينة الحل ( الفركتوز تركيز 5-200 ميكروغرام / مل ) أضيفت إلى 0.2 مل ريسورسينول الحل 2 مل 30 ٪ حمض الهيدروكلوريك ، ثم مختلطة في 80 ℃ لمدة 10 دقائق . درجة حرارة حمام الماء يجب أن تسيطر عليها بدقة : 80 ± 0.5 ℃ . . . . . . . عندما ارتفعت درجة الحرارة إلى 85 ℃ الجلوكوز اضطراب ارتفع من 1.5 في المائة إلى 8 في المائة . إذا كان أقل من 75 ℃ الفركتوز لا لون - كاملة - كاملة . بعد التسخين ، يبرد الماء لمدة 3 دقائق ، في 480 نانومتر . منحنى القياسية المستخدمة لتحليل الفركتوز النقي ، وتركيز 20 , 50 , 80 , 140 , 200 ميكروغرام / مل .

مجموعة خطية و كاشف الاستقرار في الكشف عن انزيم

إذا كان محتوى الفركتوز في العينة أقل من 5 ميكروغرام / مل ( إذا كان عصير العسل المخفف ) ، hexokinase-phosphoglucose ايزومريزاسيون اقتران الطريقة المستخدمة . المبدأ : hexokinase فسفرته fructose-6-phosphate ، فوسفات الجلوكوز إيزوميراز تحويلها إلى 6-phosphate الجلوكوز ، ثم 6-phosphate نازعة الجلوكوز حفز تشكيل NADPH ، 340 نانومتر الكشف . مجموعة خطية من 0.1 إلى 80 ميكروغرام / مل . الانزيم مختلطة الحل يجب أن تكون معبأة في - 20 ℃ وتخزينها قبل العمل السائل مذاب و يستخدم في غضون 2 ساعة . نشاط phosphoglucose إيزوميراز يجب التحقق بشكل دوري : إذا كان الانحراف عن القيمة النظرية أكثر من 5 ٪ من إنتاج NADPH مع تركيز معروف الفركتوز حل القياسية ، وهذا يعني أن انزيم المعطل ، دفعة جديدة يجب استبدالها .

أساس اختيار اثنين من الأساليب : مصفوفة التدخل والتكلفة

ريسورسينول الأسلوب هو مناسبة لأنّ عينات مع نسبة عالية من الفركتوز ، وانخفاض البروتين ، مثل المشروبات الغازية والفواكه المحفوظة استخراج . ومع ذلك ، في وجود السكروز ، الجلوكوز والفركتوز يمكن أن تحلل تحت ظروف حامضية ، مما يؤدي إلى ارتفاع النتائج . طرق الفصل : الفركتوز كان كثف من قبل راتنج التبادل الأيوني ( dowex 1 × 8 ، خلات نوع ) و السكروز كان يعاير من قبل acidolysis . . . . . . . الأنزيمية خصوصية قوية ، لا تتداخل مع السكروز والجلوكوز ، ولكن تكلفة كاشف حوالي 8 مرات من اللونية الأسلوب . مختبر الفحص الروتيني أوصت اللونية . الانزيمات المستخدمة في مراقبة جودة الأدوية أو الأوراق البحثية التي تتطلب دقة .

طبق اللونية واختيار فارغة تصحيح

480 نانومتر الطول الموجي في المنطقة الزرقاء ، ينبغي استخدام الزجاج اللونية ( الكوارتز يمكن أيضا ، ولكن ليس من الضروري ) . قطرها 1 سم ، يجب غسلها مع الإيثانول المياه ( 1 : 1 ) قبل الكشف ، ثم شطف مع ديونيزيد المياه ، ثم مسح الجدار الخارجي . كل عينة يجعل كاشف فارغة : 1 مل من الماء المقطر بدلا من عينة السائل ، نفس العملية . وفي الوقت نفسه ، عينة فارغة : لا ريسورسينول كاشف المضافة في عينة السائل ، الماء المقطر يستخدم لتصحيح حجم العينة نفسها اللون . الامتصاصية النهائية = عينة اللون الامتصاصية - عينة فارغة الامتصاصية - كاشف فارغة الامتصاصية . إذا كانت العينة فارغة الامتصاصية أعلى من 0.1 ، فإنه يدل على أن هناك صبغات في استخراج السائل ، و decolourized بواسطة C18 الصلبة مرحلة الاستخراج العمود .