التهجين الحمض النووي الجزيئي مربع ( وتسمى أيضا التهجين الجزيئي الصك ، فرن التهجين ) هو المعدات الأساسية لتحقيق التهجين محددة من الحمض النووي أو البروتين في علم الأحياء الجزيئي التجربة . وفيما يلي وصف مفصل من المعدات من حيث المبدأ ، عملية تدفق والمسائل التي تحتاج الى اهتمام .

مبدأ وظيفة أساسية من وظائف الجهاز

على أساس مبدأ قاعدة تكميلية الاقتران ، الحمض النووي الجزيئي التهجين مربع يمكن أن تجعل علامة التحقيق على وجه التحديد جنبا إلى جنب مع تسلسل الهدف من خلال التحكم في درجة الحرارة ، الرطوبة والاهتزاز . الجهاز يتكون عادة من نظام التحكم في درجة الحرارة ، بالتناوب / تتأرجح الجهاز ، مختومة المقصورة وحدة التحكم الذكية . وتشمل السمات التقنية :

1 . دقة التحكم في درجة الحرارة : استخدام نظام مراقبة الحواسيب الصغيرة ، درجة الحرارة تقلب مجموعة عادة ± 0.5 ℃ ، وارتفاع درجة الحرارة سرعة تصل إلى 5 ℃ / دقيقة ، لضمان استقرار البيئة الهجينة .

2 . متعددة الوظائف نمط الحركة : دعم أفقي الروتاري زجاجة ، أنبوب الطرد المركزي الرأسي أو صينية تتأرجح تتأرجح ، مجموعة من سرعة دوران أكثر من 5-50 دورة في الدقيقة قابل للتعديل ، وتعزيز موحدة نفاذية السائل الغشاء ؛

3 . تصميم الحماية الأمنية : مجهزة مع درجة حرارة عالية جدا من الحماية من انقطاع التيار الكهربائي ، الأشعة فوق البنفسجية تطهير واجهة مانعة للتسرب الختم الدائري ، وخاصة بالنسبة للنظائر المشعة وسم التجربة .

عملية موحدة

1 - مرحلة الإعداد قبل التجربة

- إعداد العينات والتحقيق

بعد استخراج الحمض النووي الجينوم / الحمض النووي الريبي ، الحمض النووي الحمض النووي الحمض النووي الحمض النووي الحمض النووي الحمض النووي الجينوم / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي الريبي / الحمض النووي

- يوصى باستخدام صبغة 3 ² P أو صبغة فلورية عند تركيز يتراوح بين 1 و 10 نانوغرام / مل لتحقيق التوازن بين الحساسية والضوضاء الخلفية .

- أداة التصحيح

- تنشيط التسخين إلى درجة الحرارة المستهدفة ( على سبيل المثال ، في 65 ℃ التهجين الجنوبي الدائم ) ، ومدة التسخين لا تقل عن 20 دقيقة؛

- التحقق من التوافق بين قوسين في المقصورة ، واختيار المناسب عبر الأنابيب أو الشرائح وفقا لحجم الغشاء ، وضمان عدم تخفيف .

2 - الخطوات الأساسية في التهجين

- إغلاق قبل التهجين

بعد غمر الغشاء ، تناوب البرنامج ( 15-30 دورة في الدقيقة ) بدأت ، ثم حضنت في 42-65 ℃ لمدة 1-2 ساعة ، غير محددة ملزمة المواقع منعت .

- مسبار التهجين

بعد إزالة prehybrid الحل ، الحل ( 1-10 نانوغرام / مل ) مع التحقيق أضيفت إلى ضبط درجة الحرارة إلى TM - 5 ℃ ( على سبيل المثال ، التحقيق TM مع 50 ٪ ع المحتوى ∶ 95 ℃ ، درجة حرارة التهجين كان 90 ℃ ) لمدة 8-16 ساعة . هذه المرحلة يجب أن تكون صارمة لتجنب الضوء الفلورية التبريد .

3 . بعد تجهيز و الكشف عن إشارة

- عملية الاستخراج التدريجي

2 × التعاون فيما بين بلدان الجنوب → 0.5 × التعاون فيما بين بلدان الجنوب → 0.1 × التعاون فيما بين بلدان الجنوب العازلة تستخدم لغسل في التسلسل الهرمي ، بقايا السائل يجب أن يكون امتص قبل كل تغيير السائل ، وارتفاع تركيز الملح المرحلة الحفاظ على درجة حرارة الغرفة ، وانخفاض الملح المرحلة يمكن أن تكون مناسبة ارتفاع درجة الحرارة إلى 60 درجة مئوية من أجل تحسين خصوصية .

- تحليل التصوير

- المسبار المشع : بعد التعرض للفوسفات على الشاشة لمدة 4-24 ساعة ، تحدد قيمة مقياس الرمادية باستخدام برنامج ImageJ ؛

- علامة تشيميلومينيسسينسي : على الفور التقاط إشارة مع كاميرا CCD ، يتم التحكم في وقت التعرض في 1-10 دقائق لتجنب التشبع .

العوامل الرئيسية التي تؤثر على استراتيجية التحسين

1 - حساسية درجة الحرارة : كل انخفاض في درجة حرارة 1 ℃ يمكن أن تقلل من معدل التهجين حوالي 15 ٪ ، اقترح تحديد درجة الحرارة المثلى من خلال نافذة قبل التجربة .

2 . تركيز الملح التدرج : كل نصف قوة الأيونية من محلول الغسيل ، وزيادة الدقة حوالي 2 مرات ، أكثر من غسل قد يؤدي إلى فقدان إشارة ضعيفة .

3 - وضع الاهتزاز الميكانيكي : سميكة فيلم عينة ( على سبيل المثال ، قسم الأنسجة ) ، وانخفاض وتيرة التذبذب هو المفضل للحد من خطر الضرر المادي .

الصيانة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها

1 - الصيانة اليومية

- إفراغ النفايات السائلة بعد كل استخدام ، وشطف الأنابيب المهجنة بالماء النظيف ، ثم نقع في 70 ٪ من الإيثانول لمدة 30 دقيقة .

- معايرة أجهزة استشعار درجة الحرارة بانتظام ( يوصى مرة كل ثلاثة أشهر ) ، والتحقق من فعالية وظيفة التعقيم مصباح الأشعة فوق البنفسجية .

2 - معالجة المسائل المشتركة

- ارتفاع مستوى الضوضاء في الخلفية : إطالة فترة ما قبل التهجين إلى 3 ساعات أو زيادة تركيز مانع التسرب؛

- فقدان الإشارة : التحقق من الحفاظ على التحقيق ( تجنب تكرار التجميد والذوبان ) والتأكد من أن قيمة الرقم الهيدروجيني من السائل الهجين هو 7.0-7.4 ;

- جهاز إنذار : في حالة وجود رمز الخطأ E-01 ، إيقاف على الفور للتحقق من حالة إغلاق قفل الباب واستقرار إمدادات الطاقة .

عملية التهجين الحمض النووي الجزيئي مربع يجب أن تأخذ في الاعتبار الطبيعة العلمية والمعيارية ، من إعداد العينات وتحليل البيانات يجب أن تكون صارمة مع المتغيرات . من خلال الاستفادة المثلى من التدرج في درجة الحرارة ، والاهتزاز المعلمة وغسل الاستراتيجية ، الهجين الكفاءة والموثوقية يمكن أن تحسن بشكل ملحوظ . مختبر الموظفين ينبغي أن تضع إجراءات التشغيل الموحدة ( سوب ) وتدريبهم بانتظام لضمان أقصى قدر من الكفاءة .