واحدكامل تلقائي الاسترداد الصكإعداد قبل العملية

إعداد الكواشف والمواد الاستهلاكية

الكواشف : بما في ذلك قالب الحمض النووي ، التمهيدي محددة ( إلى الأمام وعكس ) ، dntps ( أربعة النوكليوتيدات deoxyribonucleotides ) ، وارتفاع درجة الحرارة المقاومة بوليميريز الحمض النووي ( على سبيل المثال ، طق الانزيم ) ، العازلة ، مغ ⁺ ايون الحل . جميع الكواشف يجب أن تكون مختلطة تماما بعد ذوبان لتجنب تركيز الخطأ .

المواد الاستهلاكية : استخدام المتاح العقيم PCR أنبوب أو 96 حفرة لوحة ، لضمان ختم جيدة ، ومنع التلوث الصليب .

عملية التقسيم : الانتهاء من إعداد النظام في كاشف إعداد المنطقة ( سوبر نظيفة طاولة العمل أو السلامة البيولوجية مجلس الوزراء ) ، ارتداء القفازات أثناء العملية ، وتجنب الكلام ، والحد من تلوث الهباء الجوي .

أداة التفتيش

تأكد من أن يتم وضع جهاز PCR على مستوى منصة قوية ، وإمدادات الطاقة الجهد مطابقة وأسس جيدة .

التحقق من ما إذا كان خزان عينة نظيفة لتجنب بقايا تؤثر على درجة الحرارة التوصيل .

تنظيف خزان العينة بانتظام مع الماء والصابون ، لا تستخدم قاعدة قوية ، وارتفاع تركيز الكحول أو المذيبات العضوية .

إعداد نظام رد الفعل

كاشف مختلطة

قالب الحمض النووي ، التمهيدي ، dntps ، بوليميريز الحمض النووي ، العازلة ، مغ ⁺ الحل أضيفت إلى أنبوب الطرد المركزي العقيم في نسبة مناسبة من الماء المغلي المزدوج أضيفت إلى الحجم النهائي ( 15-50 ميكرولتر الموصى بها ) .

البارامترات الرئيسية :

قالب الحمض النووي الجودة : تجنب التدهور أو التلوث المانع ، وإلا تؤثر على كفاءة التضخيم .

التمهيدي تصميم : ضمان خصوصية ، وتجنب ديمر أو الذاتي هيكل مكمل ، درجة حرارة التخمير يجب أن تتطابق مع التمهيدي TM القيمة .

ملغ ۸ التركيز : عالية جدا أو منخفضة جدا يمكن أن تمنع نشاط انزيم ، تحتاج إلى تعديل وفقا كاشف المواصفات .

نظام التعبئة

السائل مختلطة يمكن أن تكون معبأة في أنبوب PCR بسرعة ، وتغطي مع غطاء أنبوب أو فيلم خاص لفترة قصيرة الطرد المركزي ( 1000-2000 دورة في الدقيقة ، 1 دقيقة ) لجعل السائل تغرق في قاع الأنبوب .

برنامج الإعداد بكر

برنامج درجة الحرارة المعلمة

لمسخ الأولي : 94-98 ℃ 20-30 ثانية ، حتى أن الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل معزولة تماما .

دوري التشويه والتحريف : 94-98 ℃ 20-30 ثانية ، والحفاظ على سلسلة واحدة من الدولة .

الصلب : 50-65 ℃ 20-40 ثانية ، التمهيدي و قالب محدد ملزمة ( الصلب درجة الحرارة يجب أن يكون الأمثل من خلال التدرج PCR ) .

تمديد : 72 ℃ 1 دقيقة / كيلوبايت من الحمض النووي شظايا ، طق انزيم توليف حبلا جديدا .

عدد الدورات : 20-40 مرة ، وفقا لكثرة الهدف شظايا .

التمديد النهائي : 72 درجة مئوية ، 5-10 دقائق ، تأكد من أن جميع أجزاء تمتد تماما .

الحفاظ على درجة الحرارة : 16 ℃ ، 2 دقيقة ( لتجنب الإفراط في استهلاك الضاغط ، لا تعيين إلى 4 ℃ غير محدود التخزين ) .

إعدادات وظيفة متقدمة

التدرج في درجة الحرارة : تحديد التدرج في درجة الحرارة ( على سبيل المثال ، 50-65 ℃ ) في الصلب خطوة ، وفي الوقت نفسه اختبار عدة درجات حرارة التخمير ، وتحسين الظروف التجريبية .

معدل التسخين : ضبط معدل التسخين / التبريد ( على سبيل المثال ، 3 ℃ / ق ) ، وتقصير وقت رد الفعل .

دورة زيادة درجة الحرارة أو الوقت زيادة بعد كل دورة ( على سبيل المثال ، 0.1 ℃ لكل دورة ) هو مناسبة لأنّ لمس أسفل PCR وغيرها من التجارب الخاصة .

برنامج حفظ وتشغيل

بعد إدخال اسم البرنامج ، والحفاظ على وضع الاسترداد أنبوب في خزان العينة ، إغلاق الغطاء الساخن وتشديد .

بدء تشغيل البرنامج ، في عملية التشغيل من خلال الشاشة في الوقت الحقيقي رصد درجة الحرارة والوقت ، ودعم وقفة ، تخطي الخطوات أو إنهاء البرنامج .

بعد العلاج التجريبي

تحليل المنتج

بعد الانتهاء من رد الفعل ، بكر أنبوب مأخوذ على الفور ، وحجم وتركيز المنتج تم تحليلها من قبل الاغاروز الكهربائي الهلامي أو مضان الكشف ( مثل سيبر الأخضر ) .

إذا كان لنا أن استخدام طريقة وضع العلامات الفلورية ، يجب التأكد من أن المعلمات الصك ( مثل الطول الموجي الإثارة ، والحصول على قيمة ) مباراة كاشف ، وتجنب التدخل في الخلفية إشارة .

صيانة الأجهزة

قبل إغلاق الجهاز ، وحدة تسخين يبرد إلى درجة حرارة الغرفة بشكل طبيعي لمنع الإجهاد الحراري من التلف .

معايرة أجهزة استشعار درجة الحرارة بانتظام لضمان دقة درجة الحرارة ( على سبيل المثال ، باستخدام معيار نقطة انصهار المعايرة ) .

تنظيف خزان العينة و الغطاء الساخن ، والتحقق من الختم الدائري الشيخوخة واستبدال الأجزاء التالفة في الوقت المناسب .

خامساكامل تلقائي الاسترداد الصكملاحظة

منع ومكافحة التلوث

التجربة برمتها يتبع مبدأ " لا الحمض النووي " ، واستخدام ماصة خاصة ، بندقية الرأس و ملابس العمل ، وتجنب التلوث الصليب .

مراقبة سلبية ( بدون قالب ) و مراقبة إيجابية أنشئت لرصد موثوقية النظام التجريبي .

عملية آمنة

تجنب فتح الغطاء الساخن عند تشغيل جهاز PCR ، ومنع ارتفاع درجة الحرارة السمط أو تبخر العينة .

لا تستخدم أدوات التنظيف السائل للتآكل لمنع تلف المكونات الإلكترونية .

استكشاف الأخطاء وإصلاحها

لا تضخيم المنتج : التحقق من جودة القالب ، التمهيدي تصميم أو معلمات البرنامج ( مثل درجة حرارة التخمير عالية جدا ) .

غير محددة الشريط : تحسين درجة حرارة التخمير أو زيادة تمديد الوقت ، والحد من تشكيل ديمر .

تذبذب درجة الحرارة : الاتصال مهندس معايرة الصك لضمان درجة الحرارة التوحيد ( على سبيل المثال ± 0.2 ℃ ) .