تشيميلومينيسسينسي الخرزفي عملية الكشف ، فإنه من السهل أن تتأثر الخرز المغناطيسي الأداء ، وظروف التشغيل ، رد فعل النظام ، مما يؤدي إلى مشاكل مثل تجميع الخرز المغناطيسي ، غير طبيعي إشارة مضيئة وضعف الكشف عن التكرار . من أجل حل المشكلة الأساسية ، فإنه يمكن تحقيق كفاءة عالية من خلال الاستفادة المثلى من اختيار المواد ، وتعديل معايير التشغيل وتوحيد طريقة الحفظ .

1 - المشكلة 1 : تجمع الخرز المغناطيسي ، لا يمكن أن تكون موزعة بالتساوي

تجميع الخرز المغناطيسي يمكن أن يؤدي إلى انخفاض في منطقة الاتصال ، مما يؤثر بشكل مباشر على حساسية الكشف .

الأسباب الشائعة

1 . كثافة سطح تعديل مجموعات ( مثل الكربوكسيل ، الأمينية ) من الخرز المغناطيسي ليست كافية ، قوة التنافر المتبادل ضعيف .

2 . الحفاظ على السائل متقلبة أو تغيير تركيز أيون ، وتدمير الاستقرار الغروية .

3 - تكرار التجميد والذوبان أثناء العملية ، مما أدى إلى الثانوية تجمع الخرز المغناطيسي .

الحل

1 . اختيار عالية الكثافة الخرز المغناطيسي ( على سبيل المثال ، مجموعة الكربوكسيل الكثافة ≥ 20 μ mol / ز ) لضمان تشتت .

2 - الحفاظ على ضوء الختم ، إضافة إلى الحفاظ على السوائل الخاصة ( مثل برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.02 في المائة أزيد الصوديوم ) ، وتجنب تركيز التقلبات .

3 . بعد إذابة الجليد ، خلط تماما مع دوامة مذبذب ( 1000-1500rpm ، 30 ثانية ) ، لا الاهتزاز الحاد .

. . . ـ

2 - المشكلة الثانية : ضعف إشارة مضيئة ، والكشف عن الحد الأدنى لا تصل إلى مستوى

كثافة إشارة مضيئة مباشرة يحدد حساسية الكشف ، وضعف إشارة يرتبط عادة مع انخفاض كفاءة التفاعل . . . . . . .

الأسباب الشائعة

1 . انخفاض كفاءة اقتران المغناطيسي الخرز مع الأجسام المضادة / مستضد ، وعدم كفاية ملزمة المواقع .

2 - النشاط الضوئي الركيزة ( مثل luminol أكريدين استر ) انخفض أو إضافة كمية غير كافية .

3 - درجة حرارة التفاعل ينحرف عن أفضل مجموعة ( عادة 25-37 ℃ ) ، نشاط انزيم هو الكبت .

الحل

1 - تحسين حالة اقتران : ضبط درجة الحموضة ( على سبيل المثال ، عندما يقترن مع مجموعة الكربوكسيل الخرز المغناطيسي ، ودرجة الحموضة = 5.0-6.0 ) ، إضافة EDC / NHS المنشط ، وتحسين كفاءة اقتران أكثر من 80 ٪ .

2 . استخدام الطازجة التي ينبعث منها ضوء الركيزة ، وفقا لتعليمات التحكم بدقة الجرعة ( مثل 100 ميكرولتر / حفرة ) ، وتجنب تكرار التجميد تحسن .

3 - استخدام درجة حرارة ثابتة الحضانة الصك ( ± 0.5 ℃ ) لضمان استقرار درجة حرارة التفاعل ، وتجنب تقلبات درجة حرارة الغرفة تؤثر على نشاط انزيم .

. . . ـ

3 - المشكلة الثالثة : ضعف الكشف عن التكرار ، السيرة الذاتية عالية جدا

سوء التكرار ( السيرة الذاتية > 10 ٪ ) يمكن أن يؤدي إلى نتائج غير موثوق بها ، ومعظمهم من العمليات أو نظام الاتساق .

الأسباب الشائعة

1 . حجم الخطأ عند إضافة عينة من الخرز المغناطيسي هو كبير ( على سبيل المثال ، الدقة من الماصة ليست كافية ) .

2 . الوقت الفاصل المغناطيسي ليست هي نفسها ، مما يؤدي إلى اختلاف غير ملزمة المغناطيسي الخرز .

3 . غسل خطوة غير قياسي ، الشوائب المتبقية تتداخل مع تألق رد الفعل .

الحل

1 . استخدام عالية الدقة ماصة ( على سبيل المثال ، 10-1000 μ ل ، خطأ ≤ ± 1 ٪ ) ، معايرة قبل إضافة العينة ، لضمان أن حجم كل ثقب هو نفسه .

2 - تحديد وقت الفصل المغناطيسي ( على سبيل المثال ، 5 دقائق ) ، واستخدام المغناطيسي مع وظيفة توقيت الإطار ، لتجنب تقلبات الوقت .

3 - استخدام " نقع - امتصاص " خطوة ( على سبيل المثال ، 200 ميكرولتر من سائل الغسيل في كل حفرة ، بعد 30 ثانية من نقع ، امتصاص الجافة ) ، كرر 3 مرات ، لضمان أن تبقى أقل من 5 ميكرولتر .

4 - السؤال الرابع : سرعة الترسيب ، رد فعل عملية التبطين

سرعة الترسيب من الخرز المغناطيسي يمكن أن يؤدي إلى رد فعل غير كافية ، لا سيما في مرحلة الحضانة ، مما يؤثر على نتيجة التوحيد .

الأسباب الشائعة

1 . حجم حبة كبيرة جدا ( على سبيل المثال > 500nm ) ، تأثير الجاذبية أكبر من قوة التشتت .

2 - نظام رد فعل اللزوجة المنخفضة ، لا يمكن أن تدعم تعليق الخرز .

الحل

1 . اختيار مناسبة حجم الجسيمات المغناطيسية الخرز ( 100-300nm الموصى بها في الكشف الروتيني ) لتحقيق التوازن بين التشتت المغناطيسي سرعة الاستجابة .

2 - إضافة كمية صغيرة من مثخن ( مثل 0.1 في المائة جيش صرب البوسنة ) في رد فعل السائل ، وزيادة اللزوجة من النظام ، والحد من سرعة الترسيب . مزيج بلطف كل 10 دقائق ( 500 دورة في الدقيقة ، 10 ثانية ) عند الفقس .