مجموع النباتاتالرنااستخراج هو خطوة أساسية في البيولوجيا الجزيئية ، ونوعية مباشرة يحدد تسلسل النسخالـ PCRنجاح أو فشل المصب التجربة . ومع ذلك ، النباتاتصعبة جدار الخلية ، نشط الذاتيةRNaseو وفرة من البوليفينول السكاريد الأيضات الثانوية ، مما يؤدي في كثير من الأحيان إلى انخفاض كفاءة أساليب الاستخراج التقليدية . . . . . . . وخاصة التقليدية النيتروجين السائل طحن يدوي ، هناك العديد من المشاكل ، مثل انخفاض تدفق العلاج ، وضعف عملية التكرارالرناتدهور البيئة أصبحت عنق الزجاجة تقييد البحث .

من خلال الاستفادة المثلى من معايير التشغيل وتدفق من نوع الجدول عالية التمويه الملمسكفاءة عالية سحق ، وانخفاض درجة الحرارة حماية كاملة ، وتوحيد الانتاجتهدف إلى حل المشاكل التقنية المذكورة أعلاه بشكل منتظم .

تحليل الصعوبات التقنية و آلية التعامل مع طاحونة

لتوضيح المبادئ التقنية لهذا البرنامج ، ونحن الجمع بينالرناالتحديات الرئيسية التي تواجه استخراج مقارنة مع آلية تصميم أداة طحن المستهدفة هي كما يلي :

إجراءات التشغيل الموحدة ( مع أوراق النبات على سبيل المثال )

1. إعداد التجربة

• المعدات واللوازم: سطح المكتب تدفق عالية الملمس المطحنة ( مستحسن )7بوصةTFTشاشة تعمل باللمس ، النيتروجين السائل precooling محول ، زركونيا طحن الكرة ( القطر )3-5 مملاRNase 2 ملأنابيب الطرد المركزيالرنااستخراج عدة .

• حماية آمنةارتداء القفازات المضادة للتجميد ، نظارات واقية ، والملابس الواقية في جميع أنحاء العملية لضمان تغطية مغلقة ، وظيفة الكبح في حالات الطوارئ العادية .

2. خطوات التشغيل الأساسية

1. عينة المعالجةفي غيابRNaseطاولة العمل50-100 ملغأوراق طازجة ، قطع1-2 ممشظايا ، وضعت بسرعة في1 ملتكسير السائل1في أنبوب الطرد المركزي من طحن الخرز ، وغطاء محكم ملحوظ .

2. محول precoolingالغمر محول أنبوب العينة بشكل متناظر في النيتروجين السائل1-2دقيقة حتى النيتروجين السائل يتوقف عن الغليان ، تأكد من أن العينة المجمدة .

3. أداة إعداد المعلمة: بدء وضع درجة حرارة منخفضة اللف الصك ، في انتظار درجة حرارة الغرفةأقل من 30℃بعد تعيين المعلمة : التردد30-35 هرتزالوقت45 – 60تمكين التسارعوبرنامج التباطؤ )2التبديل في ثوان

4. تبدأ عملية الطحنإزالة محول سريع من النيتروجين السائل )هذه الخطوة يجب أن تسيطر على30ثانيةتركيب و إغلاق الغطاء على الفور ، بدء البرنامج . بعد الانتهاء من نقل عينة أنبوب الجليد مربع .

5. الرناالانتعاش الأوليس4℃، 5000 دورة في الدقيقةطرد مركزي30ثانيا ، تكسير السائل مختلطة مع خليط .الرناتنقية خطوة .

3. نقاط الاهتمام الرئيسية

• السيطرة على الوقتصارم“ذهب30ثانية" ومن حيث المبدأ ، وتجنب ذوبان العينة قبل البدء .

• مبدأ التوازنعينة أنبوب يوضع بشكل متناظر ، ثقب واحد فرق الوزن لا يتجاوز10 ملغمنتدى

• المعلمة مطابقةالمعلمات الأمثل لمختلف المنظمات ، يرجى الرجوع إلى الجدول التالي :

نباتاتالرناالجدول 1 الأمثل لاستخراج المعلمات طحن

ثالثاً - المزايا البرنامجية وتقييم الجودة

1. ميزة أساسية

• نوعية ثابتة: كامل انخفاض درجة الحرارة وكفاءة عالية سحق ضمانالرناالنزاهةإضافةقيمة ثابتة8.5الطريقة التقليدية6.0) ; الاغاروز الكهربائي الهلامي عرض28S / 18S rRNAالشريط واضح ، لا تدهور الذيل .

• عالية الغلة ، نقاء جيدة: لكل مليغرام من الأنسجةالرنامعدل العائد4-6 ميكروغرامونانودروبكشفOD260 / 280في2.0 – 2.1وOD260 / 230 ≥ 1.8الحد من بقايا السكاريد60%أعلاه .

• كفاءة ممتازة: دفعة واحدة192عينة طحن مطلوب فقط15دقيقة ، حفظ80%الوقت معامل الاختلاف في دفعة(السيرة الذاتية)أقل5%تكرار عالية .

• تطبيق على نطاق واسعمن خلال تعديل المعلمات ، يمكن أن تكون مناسبة مع الأعشاب والخشب والطحالب البوليفينول عالية المحتوى من النباتات الخاصة ( مثل الشاي ، سالفيا miltiorrhiza ) .

2. توحيد عملية تقييم الجودة

1. النزاهةاستخدامأجيلنت 2100محلل بيولوجيأكثر من 8تسلسل النسخ القياسيةأكثر من 7عاديالـ PCRالمؤهلين .

2. نقاء: الأشعة فوق البنفسجية للكشف عن الإجار ،OD260 / 280نسبة1.9 – 2.2و ليس هناك قمة .OD260 / 230 ≥ 1.7منتدى

3. معدل العائد: fluorimetric طريقة دقيقة لتحديد التركيز ، جنبا إلى جنب مع عينة أولية من الوزن لحساب كفاءة الاستخراج .

رابعاً - الخلاصة والتوقعات

سطح المكتب تدفق عالية طحن الأنسجة من خلال “عالية التردد سحق-انخفاض درجة الحرارة حماية-تصميم لمنع التلوث" و من خلال التعاون التقني الثلاثيالرنااستخراج أربعة الألغاز الأساسية . عملية التوحيد لا يضمن فقطالرناعينات ذات جودة عالية والاستقرار عالية ، ولكن أيضا مع تدفق ممتازة مثل دراسة البيولوجيا الجزيئية للنباتات واسعة النطاق ( على سبيل المثالGWASوالـ ncRNAالبحث ) يوفر دعما قويا .

نتطلع إلى المستقبل ، مع تطور تكنولوجيا التحكم الذكي و إنترنت الأشياءالذكاء الاصطناعيالمعلمة نظام التكيفمن أجل تحقيق في الوقت الحقيقي تتبع ذكي مطابقة البيانات التجريبية ، ودفع البحوث النباتية إلى مستوى أعلى من التوحيد ، الأتمتة والذكاء .