دقة ultramicro الإجار هو المفتاح لنجاح التجربة . العوامل الرئيسية التي تؤثر على دقة تحليل منهجي من الجوانب التالية : النظام البصري ، وتجهيز العينات ، ومراقبة البيئة ، معايرة وصيانة البرمجيات الخوارزميات و مواصفات التشغيل .

الوظيفة الأساسية للنظام البصري

1 . مصدر الضوء الاستقرار

السطوع تقلب مصدر الضوء ( مثل مصباح زينون ، الصمام أو مصباح الديوتيريوم ) يؤثر بشكل مباشر على استقرار خط الأساس الامتصاصية . عالية الاستقرار مصدر الضوء ( مثل نبض مصباح زينون ) يمكن أن تقلل من تقلبات لحظية ، في حين أن مصدر الضوء LED يصبح التيار الرئيسي بسبب الخدمة الطويلة في الحياة ، وانخفاض الحرارة . مصدر الضوء الشيخوخة يمكن أن يؤدي إلى انحراف الطول الموجي وكثافة التوهين ، تحتاج إلى استبدال بانتظام ( عادة معايرة مرة واحدة في السنة ) .

2 . تصميم أحادي اللون و مسار الضوء

عرض النطاق الترددي من مستوحد اللون يحدد نقاء الضوء يدخل الكاشف . عرض النطاق الترددي الضيق ( على سبيل المثال ، 1-2 نانومتر ) يمكن أن تقلل من الضوء الشارد التدخل ، ولكن يمكن أن تقلل من قوة الإشارة . على الرغم من أن النطاق العريض ( على سبيل المثال ، 8 نانومتر ) يزيد من حساسية ، تداخل طيفي الخطأ قد يكون عرض . اثنين من شعاع ضوء مسار التصميم ( متزامن قياس عينة إشارة نسبة ) يمكن أن تعوض مصدر الضوء تموج ، حيود الكفاءة المجسم مقضب يؤثر بشكل مباشر على كثافة التوزيع .

3 . حساسية كاشف

استجابة خطية من الثنائي الضوئي أو اتفاقية مكافحة التصحر كاشف يحدد الحد الأدنى للكشف عن انخفاض تركيز العينة . حساسية عالية للكشف عن ( مثل الأشعة فوق البنفسجية تعزيز اتفاقية مكافحة التصحر ) يمكن التقاط إشارة ضعيفة ، ولكن ينبغي إيلاء الاهتمام إلى تأثير التشبع مجموعة ديناميكية ( على سبيل المثال ، 0-2.5 أو ) يجب أن تتطابق مع تركيز العينة .

ثانياً - التفاصيل الرئيسية لتجهيز العينات

1 . حجم الدقة

الترا مايكرو الكشف ( 0.5-2 μ ل ) يتطلب دقة عالية في نقل السوائل . الهواء التشرد ماصة يمكن أن يؤدي إلى حجم الانحراف بسبب الخطأ المتبقي ، لذلك فمن المستحسن استخدام عكس التشرد واسطة أو خاصة مايكرو ماصة ( على سبيل المثال ، pipetone ) .

2 - تجانس العينة

عينات صغيرة عرضة فقاعات ، الجسيمات الترسيب أو التبخر . نوصي قصيرة الطرد المركزي ( على سبيل المثال ، 10 ثانية * 1000 دورة في الدقيقة ) بعد دوامة الاختلاط ، والكشف الفوري . ارتفاع اللزوجة عينات ( على سبيل المثال ، الانحلال الحراري السائل ) تحتاج إلى تمديد وقت التوازن لتجنب الفرق في القطر .

3 - المخلفات والتلوث العابر

بقايا من طبق اللونية أو الكشف عن السطح يمكن أن تتداخل بشكل كبير مع القياسات اللاحقة . استخدام المتاح الأشعة فوق البنفسجية شفافة من البلاستيك طبق اللونية ( مثل الكوارتز الألياف المواد ) يمكن أن تقلل من أخطاء التنظيف ، أو من خلال برنامج التحكم التلقائي وظيفة التنظيف ( مثل الماء المقطر + الإيثانول بالتناوب التنظيف ) للحد من بقايا .

السيطرة على العوامل البيئية

1 - درجة الحرارة والرطوبة

تذبذب درجة الحرارة يمكن أن يؤدي إلى تغيير مؤشر الانكسار من العينة ، مما يؤدي إلى انحراف مسار الضوء ( على سبيل المثال ، 1 درجة مئوية يمكن أن يؤدي إلى امتصاص الانجراف 0.005 أو ) . الحفاظ على درجة حرارة ثابتة ( ± 1 ° C ) في المختبر ، وتجنب الاتصال المباشر مع مصدر الضوء البارد ( مثل التسخين إلى درجة حرارة الغرفة ) . الرطوبة المفرطة يمكن أن يؤدي إلى التكثيف من المكونات البصرية ، واقترح السيطرة على 40 ٪ - 60 ٪ .

2 . الاستقرار الميكانيكية

الاهتزاز ( على سبيل المثال > 0.1 مم السعة ) يمكن أن يؤدي إلى انحراف مسار موازى ، مما يؤثر على موقع بقعة . الصك يجب أن توضع على امتصاص الصدمات الجدول أو بعيدا عن المعدات الكبيرة ( مثل أجهزة الطرد المركزي ) . تكرار دقة تحديد المواقع ( على سبيل المثال ± 0.01 ملم ) من عينة الجدول يؤثر بشكل مباشر على الاتساق في مسار الضوء .

3 - الإضاءة والتدخل الكهرومغناطيسي

الضوء المحيط ، ولا سيما الضوء بالقرب من الكشف عن الطول الموجي ، قد يكون مخطئا في إشارة من قبل الكاشف . يجب أن تعمل في ظل ظروف التظليل ، بعيدا عن المجالات الكهرومغناطيسية القوية ( مثل تحويل التردد إمدادات الطاقة ) ، من أجل منع المكونات الإلكترونية من الضوضاء التدخل .

توحيد المعايرة والصيانة

1 - اختيار ضوابط فارغة

فارغة الحل يجب أن تكون مطابقة مع عينة مصفوفة ( على سبيل المثال ، مع نفس دفعة عازلة بدلا من المياه النقية ) للقضاء على خلفية الاستيعاب . من أجل تسلسل الحمض النووي ، فمن المستحسن استخدام تي عازلة فارغة ، والتحقق من الامتصاصية بانتظام ( على سبيل المثال ، ينبغي أن يكون أقل من 0.02 أو 260 نانومتر ) .

2 . الطول الموجي المعايرة

الطول الموجي معايرة دقيقة مع الزئبق أو هولميوم الزجاج مرشحات ( مثل 245 نانومتر ، 279 نانومتر مميزة قمم ) مع انحراف أقل من 0.3 نانومتر . الديوتيريوم مصباح يمكن استخدامها لمعايرة الأشعة فوق البنفسجية في المنطقة ( 190-340 نانومتر ) ، في حين أن الضوء المرئي في المنطقة ( 340-1000 نانومتر ) يعتمد على النيوديميوم فلتر .

3 - عمليات الصيانة الدورية

- تنظيف المكونات البصرية : استخدام ورقة ممسحة مرآة كل شهر غمس في الكحول لمسح نافذة الكوارتز في اتجاه واحد ، وتجنب الخدش .

- التحقق من أطباق اللونية : التحقق من الأخطاء في مسار الضوء ( على سبيل المثال ، 1 ملم فرق المسار يمكن أن يؤدي إلى تركيز 1 ٪ خطأ ) واستبدال أطباق اللونية الشيخوخة كل ستة أشهر .

- تصحيح التيارات المظلمة : يتم قياس الإشارات الخلفية الكاشف يوميا في بيئة مظلمة ، وتستخدم لتصحيح البيانات اللاحقة .

برامج معالجة البيانات الأمثل

خط الأساس خوارزمية التصحيح

البرمجيات المتقدمة يمكن أن تعوض مصدر الضوء الانجراف من خلال تركيب نقاط متعددة ( مثل كثيرات الحدود التربيعية ) أو استخدام مزدوج شعاع في الوقت الحقيقي إشارة تقنية . بعض النماذج التي توفر " ذكي خط الأساس " وظيفة ، تلقائيا تحديد مصدر الضوء وتقلب التكيف الدينامي .

2 . الضوضاء تصفية وتمهيد

المتوسط المتحرك ( على سبيل المثال ، 3-5 مرات مسح متوسط ) يمكن أن تقلل من الضوضاء العشوائية ، ولكن على نحو سلس سوف تفقد ذروة حقيقية الشكل . من المستحسن اختيار مرشح المعلمات حسب نوع العينة ( على سبيل المثال ، على نحو سلس نافذة واسعة تستخدم لتحديد الحمض النووي ) .

نموذج حساب تركيز

من الضروري التحقق من انطباق قانون ( أ = ε LC ) . في تركيزات عالية من العينات ( أ > 1 أو ) ، يجب أن تكون مخففة و اختبارها مرة أخرى . من أجل نشر عينات ( على سبيل المثال ، جسيمات متناهية الصغر ) ، تحتاج إلى استخدام خوارزمية تصحيح التعكر .

معايير التشغيل و العوامل البشرية

1 . عينة تحميل الاتساق

عند تحميل العينة يدويا ، تأكد من أن قطرات تغطي منطقة الاختبار و لا تجاوز . استخدام التلقائي حاقن يمكن أن تقلل من الأخطاء البشرية ، ولكن دقة نقل السوائل ( على سبيل المثال ، السيرة الذاتية قيمة أقل من 5 في المائة ) .

2 - آلية استعراض البيانات

على الأقل ثلاث مرات في نفس العينة ، يعني الانحراف المعياري حسبت . القيم الشاذة ( على سبيل المثال ، الانحراف عن متوسط > 2 SD ) يجب إزالتها و التحقيق في أسباب ( على سبيل المثال ، فقاعات أو التلوث ) .

3 - التدريب والمهارات

المشغل يجب أن تكون مألوفة مع مبدأ الحد من الصك ، وتجنب إساءة استخدام ( مثل الأشعة فوق البنفسجية للكشف عن البروتين مع إهمال 280nm ذروة الامتصاص ) . التدريب المنتظم يمكن أن تقلل من الأخطاء الناجمة عن سوء العمليات ( مثل سوء اختيار الطول الموجي أو إهمال خطوات التسخين ) .