الحبل السري الخلايا الجذعية الوسيطة( huc-mscs ) هو نوع من الخلايا الجذعية المستمدة من الحبل السري لحديثي الولادة مع multipotential التمايز . الحبل السري المستمدة من الخلايا الجذعية الوسيطة ليس فقط الحفاظ على الخصائص البيولوجية للخلايا الجذعية الوسيطة ( المستضد السطحي العلامات ، مع القدرة على التمايز إلى خلايا الأوستيوبلاستس ، غضروفية ، والخلايا الدهنية ، وما إلى ذلك ) ، ولكن أيضا بالمقارنة مع غيرها من مصادر الخلايا الجذعية الوسيطة أكثر أمانا وأكثر بدائية ، وتكاثر الخلايا ، والتمايز immunoregulatory قدرة أقوى .
وبالإضافة إلى ذلك ، الحبل السري الخلايا الجذعية الوسيطة لديها العديد من المزايا ، مثل سهولة فصل المواد ، وانخفاض المناعة ، لا قيود أخلاقية ، عدد كبير من الخلايا المتاحة ، على نطاق واسع الإنتاج موحدة ، وما إلى ذلك ، لديها آفاق واسعة التطبيق السريري . هذا المنتج يخضع لمراقبة الجودة الصارمة والاختبار لضمان سلامتها وفعاليتها .
( 1 ) عندما كثافة الخلية تصل إلى 80 ٪ - 90 ٪ ، يمكن أن تحمل على مرور ( لاحظ أن الخلية لا يمكن أن تكون كثيفة جدا ، وإلا من السهل التفريق ) ، تجاهل الثقافة طاف ، لا تحتوي على الكالسيوم والمغنيسيوم الأيونات dpbs ترطيب الخلايا 1-2 مرات .
( 2 ) إضافة 1 مل التربسين المؤتلف في قارورة الثقافة ، وجعل الجهاز الهضمي السائل تتسرب إلى جميع الخلايا ، ووضعها في 37 ℃ حاضنة الهضم لمدة 1-3 دقائق ، لاحظ تحت المجهر ، حتى معظم الخلايا تصبح الجولة و تسقط ( اعتمادا على حالة الخلية ) .
( 3 ) إضافة إلى أنبوب الطرد المركزي العقيم ، 1000 دورة في الدقيقة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق ، والتخلص من 3 مل ماجستير متوسطة لإنهاء الهضم . بلطف إزالة طاف ، إضافة 1-2ml ماجستير متوسطة ، ثم تهب .
( 4 ) تمر على نسبة 1 : 3 أو 1 : 4 ، أو عدد الخلايا ، ثم تلقيح في ثقافة جديدة زجاجة مع تركيز 5-8 × 103cells / سم 2 ، تجديد ماجستير متوسطة الثقافة في 37 ℃ و 5 ٪ من ثاني أكسيد الكربون .
( 5 ) تغيير السائل مرة واحدة كل 2-3 أيام ، ومثقف لمدة 2-4 أيام حتى كثافة نمو الخلايا تصل إلى 80 ٪ أو نحو ذلك ، بعد مرور أو التجميد .
الهضم الوقت : البنكرياس الهضم يجب التحكم في حوالي 1 دقيقة ، وتجنب الإفراط في الهضم يؤدي إلى تلف الخلايا .
كثافة التلقيح : تمرير نسبة 1 : 3 إلى 1 : 4 في المنطقة السفلى ، وتجنب الإفراط في الكثافة أو تمييع .
من المستحسن استخدام خلايا الجيل الأدنى ( على سبيل المثال ، P2 ) لضمان النتائج التجريبية .
استخدام وسائل الإعلام الخاصة التي تحتوي على عوامل النمو لتعزيز تكاثر وتمايز الخلايا .