-
البريد الإلكتروني
gptchina@gyrosproteintech.com
-
الهاتف
13764581292
-
العنوان
غرفة 1609-1613 ، بلوك أ ، 380 فنغلين الطريق ، منطقة كسوهوي ، شنغهاي
Mesa Labs
كيفية جعل تحليل بقايا بروتين الخلية المضيفة ( HCP ) أكثر كفاءة وموثوق بها
التاريخ:2024-12-10اقرأ:2
بروتين الخلية المضيفة ( HCP ) هو غير الهدف البروتين التي تنتجها أو ترميز الخلايا المضيفة ( تشو ، hek2993 ، كولاي ، sf9 ، وما إلى ذلك ) ، هو العنصر الرئيسي من الشوائب ذات الصلة في عملية الأدوية البيولوجية ، على الرغم من أن معظم البروتينات المضيفة ( أكثر من 99 في المائة ) يتم إزالتها في عملية المصب ، ولكن لا يزال هناك عدد قليل من بقايا HCP شارك في تنقية مع المنتجات الصيدلانية ، بعض البروتينات المتبقية تعتبر عالية المخاطر HCPs ، بعض البروتينات المتبقية تعتبر عالية المخاطر HCPs ، قد يكون لها تأثير كبير على سلامة المنتجات الصيدلانية ، أو المواد المساعدة ، قد يكون لها تأثير كبير على سلامة عالية ، أو قد يكون لها تأثير كبير على سلامة المنتجات الصيدلانية ، أو المواد المساعدة ، أو قد يكون لها تأثير كبير على سلامة المنتجات الصيدلانية ، أو المواد المساعدة ، أو قد يكون التركيز على المشاريع ، أو قد يكون لها تأثير على المشاريع ، أو قد يكون لها تأثير على المشاريع ، أو قد يكون لها تأثير على المشاريع ، أو قد يكون على المشاريع ، أو قد يكون لها أهمية على لا , لا , لا
تشو نظام التعبير في خلايا المبيض الهامستر الصيني كانت واحدة من الأكثر استخداما في الثدييات نظام التعبير في إنتاج أدوية التكنولوجيا الحيوية مثل الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ، لأنها يمكن أن تنتج ما بعد الترجمة تعديل البروتينات المعقدة التي هي مماثلة لتلك التي تنتج في البشر . المصب تنقية تشو خلية ثقافة المتوسط عادة ما ينطوي على كروماتوجرافيا الألفة مع البروتين ، تليها خطوات تنقية لمزيد من إزالة المجاميع ، تهمة المتغيرات ، HCP ، الحمض النووي للخلية المضيفة . يتم إزالة الغالبية العظمى من HCP أثناء عملية تنقية ، ولكن قد يكون هناك بعض HCP بسبب " الهروب " إزالة بطريقتين :
1
قوات حرس السواحل الهايتية لديها القدرة على الجمع بين المنتج محددة أو غير محددة ، ويمكن حملها أثناء العملية .
2
قوات حرس السواحل الهايتية لديها القدرة على التفاعل مع البروتين الكروماتوغرافي الحشو ، مما يؤدي إلى عملية الاستخراج مع المنتج .
HCP المخاطر والتصنيف
المخاطر المحتملة HCP تتأثر بعوامل كثيرة ، بما في ذلك مؤشرات المخدرات ، طرق التسليم ، وتواتر التسليم ، عدد HCP لكل جرعة ، السكان المريض ، homologies HCP مع نظيراتها البشرية ، و / أو التجارب السريرية السابقة .
التأثير المحتمل HCP على جودة المنتج وسلامته وفعاليته :
استمناعالأجسام المضادة التي يسببها إنتاج السيتوكينات
عيارتجميع أو تدهور البروتين
استقرار: الليباز تدهور السواغات
الأمنالتفاعل مع البروتينات الذاتية ، مثل immunoadjuvant التفاعل
إن bpdg HCP العامل قد صنفت آثار عالية المخاطر HCP إلى أربع فئات على أساس القدرة على تنقية HCP واحد مع المنتج ، وتواتر حدوثها في عملية المصب ، قدرتها على تغيير أو تدهور المخدرات / السواغات ، واستمناع المحتملة :
1 ) جودة المنتج ، 2 ) الاستعدادات ، 3 ) الوظيفة البيولوجية المباشرة لجسم الإنسان ، و 4 ) استمناع .
هناك العديد من الطرق التي يمكن استخدامها لتحديد وقياس مستويات HCP الموجودة في عملية تطوير المخدرات على حد سواء كاملة وفردية محددة . كل طريقة لها مزاياها وعيوبها . معروف HCP الشوائب يمكن قياسها بشكل صحيح وفقاً لاستراتيجية التحليل الشامل التالية ، إذا تم تحديد مخاطر عالية HCP ، ثم وضع استراتيجيات مراقبة لرصد و / أو القضاء عليها .
01 قياس مجموع HCP المناعية ( مثل اليسا ) هو الأسلوب الرئيسي لتحديد مستوى HCP المتبقية لتوجيه عملية التنمية ودعم برنامج الرصد العالمي دفعة الإصدار الكشف . الكواشف الرئيسية اللازمة لتطوير مجموع HCP المناعية يجب أن تكون محددة .
02 وبالإضافة إلى ذلك ، ينبغي استخدام أساليب متعامد مثل 2D الاستشراب هلام / الغربية ، و / أو استخراج الأجسام المضادة تقارب ( AAE ) بعد تحليل الطيف الكتلي لتقييم التغطية من العوامل المضادة الرئيسية في عملية محددة HCP .
03 مجموع HCP المناعية ينبغي القيام به بشكل روتيني لتحديد مستوى HCP في عملية العينة .
04 ومن المستحسن استخدام أساليب متعامدة ، مثل قياس الطيف الكتلي و / أو إضافية واحدة للكشف عن HCP ، لضمان نقاء المنتج ، لا سيما عندما يكون مجموع مستويات HCP مرتفعة في المقايسات المناعية ، تمييع غير خطية لوحظ ، أو تأثير على جودة المنتج لوحظ .
05 إذا تم التعرف على HCP الفردية واعتُبرت عالية المخاطر المحتملة :
(أ)
قد يكون من الضروري وضع مقايسة مناعية محددة لرصد الشوائب المعروفة ، أو وضع مطياف الكتلة المستهدفة لتحسين فهم مستويات HCP وآثارها المحتملة .
(ب)
إذا تم تحديد الشوائب التي لديها نشاط انزيم ، نشاط طريقة الاختبار يمكن تطويرها لتوجيه عملية تطوير المنتجات ، ورصد ، وإزالة و / أو تعطيل البروتين .
(ج)
تقييم استمناع في السيليكا ، إذا كانت التوقعات تشير إلى أن هناك مخاطر عالية من استمناع ، مقارنة في المختبر تقييم استمناع ( ivcia ) يمكن القيام به .
(د)
دراسات السموم تقييم المخاطر السريرية .
الأساليب المستخدمة في التحليل النوعي والكمي مجموع HCP أساسا المناعية ، وعادة ما يتم الكشف عن واحد أو أكثر من إليسا . ومع ذلك ، إليسا التقليدية لديها القيود التالية :
ا
س
العديد من الحضانة والغسيل خطوات تتطلب قدرا كبيرا من التشغيل اليدوي وتحليل الوقت .
ا
س
دينامية مجموعة ضيقة جدا ( ± 100 نانوغرام / مل ) و الكثير من الاختبارات المتكررة المطلوبة أثناء عملية البحث .
ا
س
ارتفاع استهلاك العينات والكواشف يشكل تحديا في الكشف عن مستويات منخفضة من مركبات الكربون الهيدروكلورية فلورية ، لأن إنتاج ما يكفي من مركبات الكربون الهيدروكلورية فلورية من المخدرات من الصعب جدا . وهذا يجعل من اليسا عنق الزجاجة في تلبية الاحتياجات المتزايدة من السرعة ، وتدفق عينة الاستهلاك .
حتى الآن ، المزيد والمزيد من شركات الأدوية قد تحولت إلى تدفق عالية المناعى منصات مثل gyrolab®إن gyrolab تقنية تستخدم الخرز المغلفة مع streptavidin لالتقاط biotinylated القبض على كاشف ، كاشف مضان المسمى يستخدم للكشف عن عينة ملزمة بعد عينة جنبا إلى جنب مع القبض على كاشف . هذا التدفق من خلال طريقة المناعية على تقارب العمود هو سريع جدا و لا تحتاج إلى وقت الحضانة ، مما يقلل كثيرا من الوقت اللازم لإكمال التحليل واستهلاك العينات والكواشف بالمقارنة مع التقليدية إليسا . كامل عملية التحكم الآلي يجعل gyrolab الكشف ممتازة التكرار . ولذلك ، gyrolab الآلي طريقة تحليل تدفق عالية يمكن أن توفر الدعم الفعال HCP التحليل في عملية التنمية ومراقبة الجودة اختبار الإصدار :
ا
تحليل سريع دوران الكفاءة ؛
ا
ممتازة كشف تدفقاتها ;
ا
نوعية البيانات موثوق بها ، نتيجة التكرار عالية .
عموما ، هذا الأسلوب يمكن أن تزيد من كفاءة قسم التحليل البيولوجي ، والحد بشكل كبير من وقت التشغيل اليدوي ، والقضاء على الحاجة إلى إعادة الاختبار بسبب تخفيف الخطأ أو خطأ في التشغيل اليدوي ، وزيادة كبيرة في الانتاج والجودة والتكرار من نتائج التحليل .
