الالتهام الذاتي هدفا واعدا للعلاج بالعقاقير

الالتهام الذاتي والاضطرابات التي تم العثور عليها في الأمراض العصبية والسرطانلعب .ولذلك ، اكتشاف أهداف علاجية جديدة في هذه العملية أصبحت واعدة العلاج بالعقاقير . الالتهام الذاتي هو عملية تنظيمية تتحلل واسترداد البروتينات التالفة والعضوية تحت الإجهاد الخلوي .1，2منتدىيكونكبسولة تسمى الالتهام الذاتيفقاعة من خلالغشاء مزدوج يتكون حول المسمى تدمير مكونات الخلية .حملتجميع1الالتهام الذاتي الحويصلات ثم تنصهر مع الليزوزومات ، تسليم محتوياتها ليسوسومال هيدرولاز التدهور .

الالتهام الذاتي لديها مجموعة متنوعة من الوظائف الفسيولوجية والمرضية المعقدة ، مثل التكيف مع المجاعة الغذائية ، والقضاء على تلف الخلايا والبروتينات العضيات ، وتطوير الخلايا ، ومكافحة الشيخوخة ، والقضاء على الكائنات الحية الدقيقة ، موت الخلايا ، قمع الورم ، وتقديم المستضد2انقسام الميتوكوندريا هو تدهور انتقائي من الالتهام الذاتي .3العملية عادة ما تكون متاحةأخذيزيل الميتوكوندريا معيبة بعد تلف الخلايا أو الإجهاد .

المواد

س PC12خطوط الخلايا العصبية البشرية )ATCCو

س 384 لوحة مثقبة )غرينرو

س معرف الخلية ®طقم اختبار الالتهام الذاتي )ENZO علوم الحياةو

س البرتقالي صبغ الميتوكوندريا

س هوكست 33342

س ImageXpressبيكو®نظام التصوير الخلوي الآلي )الأجهزة الجزيئيةو

س CellReporterXpress الحصول على البيانات وتحليل البرمجيات( أ )الأجهزة الجزيئيةو

هيمنة

تأثير كمية المركبات على الالتهام الذاتي

تجزئة الخلايا باستخدام علامات النووية ، وكشف وتوصيف الصغيرةالهدف

استخدام التصوير التلقائي لضمان موثوقية النتائج الإحصائية

الكشف عن كمية الجسيمات الالتهام الذاتي باستخدام التصوير الخلوي الآلي

تقييم تأثير الالتهام الذاتي

في هذا التطبيق، ونحن تقييمImageXpressبيكوالآلي خلية نظام التصوير بالكشف عن كمية الجسيمات الالتهام الذاتي بكفاءة .PC12خطوط الخلايا العصبية البشرية تستخدم للكشف عن نموذج التنمية . سوف الخلية 6，000 صخليةوثقب التطعيم384في فتحة48ساعة . لتقييم تأثير الالتهام الذاتي ،جعلالخلايا تعامل مع تركيزات مختلفة من الكلوروكين أو فيراباميل48ساعة . فيراباميليمكنالالتهام الذاتي الناجم عن الكلوروكينيمكنتثبيط تدهور الالتهام الذاتي الذي يؤدي إلى تراكم الجسيمات .مركب كيميائيبعد العلاجمعرف الخلية ®الالتهام الذاتي الكشفطقم لايفتلطيخ الخلاياإيشيأثرالالتهام الذاتي . وبالإضافة إلى ذلك ، ونحن الكشف عن الميتوكوندريا باستخدام صبغة الفلورسنت الميتوكوندرياهوكستنواة الاعتراف )تركيزعلى التوالي 0.2 ممو 1 مم. لا إستعمالتنسيق20Xأو .40 مرةعدسة الهدفالImageXpressبيكونظام الكشف عن ثلاث قنوات( أ )FITCوتريتكوالأزرق مضانوالخليةإجراء التصوير . في20Xعدسة الهدفالصورة التي تم جمعها في كل حفرة40 مرةتحت العدسة الشيئيةكل حفرةجمع2-4لضمان موثوقية النتائج الإحصائية . إستعمالCellReporterXpressالالتهام الذاتي أو تطبيق برنامج الميتوكوندريا في التقاط الصور وتحليلها .

الرسم البياني 1سالالتهام الذاتي الكشف .ويبين الرسم البياني أعلاهأكثرالالتهام الذاتي محفز الكلوروكين )30 pMالتعامل معجعلمستعملمعرف الخليةصبغ مصبوغPC12صورة نموذجية من الالتهام الذاتي للخلايا وتحليل قناع . فيCellReporterXpressفي هذا البرنامج ، نقطة تقسيم يستخدم لتحديد الالتهام الذاتي الجسيمات . نوىعرضالأزرق ، الميتوكوندرياعرضالبرتقالي , الالتهام الذاتيعرضالأخضر . تحتالرسم البيانيعرضجعلالخلايا غير المعالجة كانت ملطخة البرتقالي صبغ سلامة الميتوكوندريامنتدىصورة وتحليل قناع للكشف عن الميتوكوندريا .

هذه الخوارزميات يمكنأخذكشف وتوصيف الصغيرةالهدفمثل الالتهام الذاتي أو الميتوكوندريا في السيتوبلازم ، في حين أن استخدام العلامات النووية لتقسيم الخلايا . الكمية المستخدمة للكشف عن الالتهام الذاتيكشفبما في ذلك مجموع أو متوسط عدد الجسيمات ، الجسيمات ( التحت خلوية الكائن ) مجموع أو متوسط مساحة وكثافة . الكلوروكين )30 ممتجهيزبعد .صورة تمثيلية وتحليل الخلايا قناع كما هو مبين في الشكل1كما هو مبين . فحصقياسالكلوروكين وفيراباميلالخلايا المعالجةتركيز رد الفعل ، وتقييمEC50القيمة . مجموع العد أوتوفاجيكوتشير البيانات إلى أنالطلبات علاج الكلوروكين وفيراباميل منخليةمستوى الالتهام الذاتي زيادة على التوالي4.6مرات3.3عصر( أ )EC50القيم هي على التوالي4.0و3.6 مم. لا

الاستنتاج

طريقةمعرف الخليةصبغملزماختراع يمكن استخدامها للكشف عن جزيئات الالتهام الذاتي ، ويمكن استخدامها للكشف عن تأثير تطوير المركبات على الالتهام الذاتي العملية .

المراجعالوثائق

1. 1 - ميزوشيما، ن؛ Komatsu، M (2011). Autophagy: تجديد الخلايا والأنسجة. الخلية. 147: 728–41

2. 2 - ميزوشيما، ن؛ (2007). التآكل الذاتي: العملية والوظيفة ، الجينات والتطور. 21: 2861-2873