مقدمة
3D الطباعة البيولوجية بأنها وظيفية 3D هيكل أو نموذج الأنسجة الاصطناعية من الخلايا والمواد حيويا . هذه التكنولوجيا قد غيرت مجال هندسة الأنسجة ، مما يجعل من الممكن لخلق هياكل معقدة مسبقا مع ضمان التكرار . العديد من الأساليب القائمة على الطباعة البيولوجية ثلاثية الأبعاد تم الإبلاغ عن هندسة الأنسجة المختلفة ، مثل الغضروف ، 2 العظام ، 3 ، وتجديد الجلد . 4 - كما تم استخدام هذه التقنية لإنشاء نماذج جديدة من الأورام قبل السريرية . في الواقع ، كما 2D خلية ثقافة النموذج هو موضع تساؤل متزايد بسبب عدم القدرة على التنبؤ ، 3D الطباعة البيولوجية أصبحت طريقة بديلة لتجنب هذه المشكلة من خلال التعامل مع مختلف الخلايا المصفوفة خارج الخلية المستمدة من الجزيئات ، الورم المكروية النمذجة / عرض ( تيدل ) . العديد من النماذج القائمة على الطباعة البيولوجية ثلاثية الأبعاد تشمل سرطان الرئة ، سرطان الثدي 5 و 6 glioblastomas . . . . . . . 7 - هذه النماذج تظهر مزايا في التصميم ، والمرونة والتكرار بالمقارنة مع غيرها من الاستراتيجيات ، مثل كرات الخلايا والأعضاء . سرطان المبيض هو مشكلة صحية عامة كبيرة ، 3D الطباعة البيولوجية لا تزال قيد الدراسة كنموذج لسرطان المبيض . في هذا النوع من السرطان ، سرطان الخلايا الليفية ذات الصلة ( مقهى ) تتفاعل مع الخلايا السرطانية عن كثب ، تلعب دورا رئيسيا في غزو السرطان ومقاومة المخدرات . ولذلك ، مقهى هو المفتاح لتصميم نموذج سرطان المبيض .
هيمنة
عالية المحتوى فحص عابر تعداء يمكن أن تساعد في تحديد والتحقق من 3D الطباعة البيولوجية التجربة • عابر التعبير الجيني هو أداة قوية لزيادة وظيفة 3D الطباعة البيولوجية نموذج • متعدد الطول الموجي أداة التحليل ضروري للاستفادة الكاملة من قوة 3D الطباعة البيولوجية نموذج لدراسة التفاعل بين مختلف أنواع الخلايا في نموذج السكان . في هذا التطبيق ، 3D الطباعة البيولوجية المستخدمة لإنشاء نموذج سرطان المبيض بما في ذلك الخلايا السرطانية ( skov3 الخلايا ) و مقهى الليفية ( mewo الخلايا ) . skov3 الخلايا كانت transfected مع هذه الشراكه البلازميد ( jetoptimus polyplus ) و mewo الخلايا ملطخة celltracker والبرتقال cmra دى ( thermofisher ) . كلا النوعين من الخلايا الواردة في الجيلاتين الجينات الهلاميات المائية القائمة على الحصول على شكل اسطواني الورم مثل الهياكل . تم تقييم نظام التصوير باستخدام imagexpress بيكو على التجانس و تكرار توزيع الخلايا في هذه الأورام .
النتائج والمناقشات
كما هو مبين في الشكل 1 ، skov3 الخلايا عن هذه الشراكه و mewo الخلايا الملون الفلورسنت موزعة بشكل متجانس في الجيلاتين الجينات مصفوفة ( الشكل 1 ألف وباء ) . هذا أمر مهم لأن توزيع متجانس من الخلايا في الحبر الحيوي هو عامل مهم للنظر في عملية الطباعة 3D 12 . وبالإضافة إلى ذلك ، TME الطبيعية معروفة لاحتواء مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا التي تتفاعل بشكل وثيق . ولذلك ، من المهم أن تتكرر في حين بناء نموذج الورم في المختبر لتعزيز التفاعل بين السرطان و الخلايا اللحمية .
ومع ذلك ، العديد من أنواع الخلايا يجب أن تكون مجتمعة في الورم لمحاكاة أفضل تيدل التجانس . ImageXpress بيكو هو مناسبة خاصة لهذا النوع من السيطرة ، لأنه يمكن التقاط العديد من الصور المجهر بسرعة وسهولة . البرمجيات cellreporterxpress يسمح لتحديد عدد من الخلايا ، حتى مع عينات سميكة ، باستخدام أقصى قدر من z-stack الإسقاط . في هذا التطبيق التوضيحي ، هذا النظام يستخدم لتحليل نموذج لدينا ورم الطباعة البيولوجية من حيث عدد ونسبة الخلايا التي تظهر التكرار جيدة في بنية الطباعة البيولوجية 6 ، ومتوسط عدد الخلايا skov3 ( عدد الخلايا FITC ) هو 837 ± 200 ( الانحراف المعياري ≤ 25 في المائة ) . بالنسبة mewo الخلايا ( خلية العد tritc ) ، متوسط عدد الخلايا كان 3264.50 ± 462 ( شارع ≤ 15 في المائة ) .

الشكل 1 تحليل ثلاثي الأبعاد البيولوجية طباعة هيكل CMRA صبغ skov3 الخلايا التي تحتوي على هذه الشراكه البلازميد transfected و mewo الخلايا ملطخة celltracker البرتقال . أ ) FITC و tritc الصور التي تم الحصول عليها باستخدام نظام imagexpress بيكو ( 4X ، z-stack ) في حفرة B3 . ب ) تحليل أقنعة العد FITC و TRITC الخلايا التي تم إنشاؤها باستخدام برنامج CellReporterXpress . ج ) متوسط عدد الخلايا في قنوات FITC و TRITC ( 5 المسام ، تلطيخ تعداء ) والضوابط السلبية ( 3 المسام ، غير مصبوغ وغير transfected ) . د ) تقييم كفاءة ترنسفكأيشن باستخدام هذه الشراكه البلازميد و jetoptimus polyplus transfection transfection كيت ( FITC إيجابية نسبة الخلايا / tritc إيجابية الخلايا ) .

المواد والأساليب
إعداد هيدروجيل
من أجل إعداد الهلاميات المائية ، الجيلاتين ، الجينات الصوديوم مسحوق وزنها لمدة 1 ساعة تحت الأشعة فوق البنفسجية ، ثم حله في تعديل elagmedium دولبيكو مختلطة مع lowest الثقافة الأساسية المتوسطة ( ميم ) ، تكملة 10 ٪ مصل بقري جنيني . الحل هو الحصول على أن يتم الاحتفاظ بها بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية تحت التحريك المغناطيسي ، واستكمال التجانس . تعداء وتلطيخ الخلايا skov3 تعداء مع هذه الشراكه البلازميد حسب تعليمات الشركة المصنعة . 10 - وباختصار ، فإن كمية مناسبة من الحمض النووي المخفف إلى jetoptimus عازلة مناسبة إضافة jetoptimus تعداء كاشف . ترنسفكأيشن الحل تم تخزينها في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ثم أضيفت إلى مثقف skov3 الخلايا المستزرعة في t75 قارورة مع 60-80 ٪ درجة انصهار . mewo الخلايا كانت ملطخة celltracker البرتقال CMRA صبغ ( ثيرمو فيشر ) ، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة . 11 - وباختصار ، صبغ يذوب في DMSO لإعداد حل العمل ، ثم تضعف في ميم متوسطة . احتضان الخلايا في 37 ℃ لمدة 30 دقيقة . ثم أخذ كاشف الحل واستبدالها مع الطازجةاكتملمتوسطة الثقافة .

الشكل 2 تخطيطي من أساليب الطباعة البيولوجية والتصوير من سرطان المبيض نموذج الهيكل .