إن ultramicro محلل الحمض النووي ( على سبيل المثال ، ultramicro محلل الحمض النووي البروتين ) اختبار البروتين على أساس الأشعة فوق البنفسجية الطيفي المرئي ، من خلال قياس امتصاص البروتين في الطول الموجي محددة ( على سبيل المثال ، 280nm ) لتقدير تركيزها . وفيما يلي طرق محددة وخطوات رئيسية لاختبار البروتين :
مبدأ الاختبار
تريبتوفان ( الحزب ) ، التيروزين ( صور ) بقايا و cys-cys ثاني كبريتيد السندات في جزيء البروتين بشكل ملحوظ استيعابها في 280nm الطول الموجي . تركيز البروتين ( ملغ / مل ) تم حسابها مباشرة من خلال قياس الامتصاصية ( a280 ) من البروتين الحل في 280 نانومتر ، جنبا إلى جنب مع لامبرت بيل القانون . هذه الطريقة لا تحتاج إلى بناء منحنى القياسية ، ولكن يجب التأكد من أن العينة لا تحتوي على شوائب أخرى ( مثل الأحماض النووية والفينولات ) التي تمتص بقوة في 280nm . . . . . . .
ثانياً - الخطوات العملية
إعداد الصك
ربط إمدادات الطاقة ، بدء تشغيل الجهاز ، سخن لمدة 5-10 دقائق إلى حالة مستقرة .
حدد " البروتين a280 " طريقة الاختبار ، وتحديد مسار الضوء ( عادة 10 ملم ، ولكن الجهاز يمكن تعديلها تلقائيا ) .
استخدام عالية النقاء الماء المقطر أو فارغة عازلة صفر المعايرة ، والقضاء على خلفية التدخل .
عينة العلاج
حجم العينة : من المستحسن استخدام 2 μ ل عينة ( جزء من الصك يدعم 0.5-2 μ ل microdetection ) لضمان استقرار السائل العمود .
تجنب فقاعات : لمس الجزء السفلي من الكشف عن ثقب عند أخذ العينات ، والإفراج عن السائل ببطء ، ومنع فقاعات من التأثير على قياس الامتصاص .
التوتر السطحي : إذا كان التوتر السطحي من العينة منخفضة ( على سبيل المثال ، تحتوي على المنظفات ) ، يمكن زيادة كمية العينة إلى 4
على النقيض من فارغة
تأخذ 2 μ ل حل فارغة ( مثل العازلة ) إلى أسفل قاعدة ، وانخفاض قاعدة العلوي وانقر على زر " فارغة " لتسجيل الخلفية الامتصاصية .
مسح قاعدة لضمان عدم وجود بقايا السائل .
عينة اختبار
تأخذ 2 ميكرولتر من العينة التي سيتم اختبارها ، إضافة إلى انخفاض قاعدة ، وانخفاض قاعدة العلوي وانقر على زر " عينة " .
جهاز قياس الامتصاصية تلقائيا وحساب التركيز ، وعادة ما تظهر النتائج في مغ / مل .
ارتفاع تركيز العينة : إذا كان امتصاص الضوء يتجاوز نطاق الصك ( على سبيل المثال ، شدة الضوء أقل من 200 ) ، يجب أن تضعف العينة ثم إعادة الكشف عنها .
تسجيل البيانات وتنظيفها
حفظ نتائج الاختبار وتصديرها إلى CSV أو قوات الدفاع الشعبي .
مسح قاعدة مع قماش خالية من الغبار ، وتجنب التلوث الصليب .
ثالثاً - الاعتبارات الرئيسية
معايرة خط الأساس
الطول الموجي معايرة خط الأساس الافتراضي هو 340nm ، يمكن للمستخدم ضبط حسب الحاجة .
معايرة يجب أن تكتمل قبل اختبار العينة ، وإلا فإن القيمة الطيفية سوف يقابله ، مما يؤدي إلى تركيز خطأ في الحساب .
نقاء العينة
عينة تحتوي على الحمض النووي ، الفينول ، أو تركيز عال من أيونات الملح هو تجنب هذه المواد قد تتداخل مع امتصاص 280nm . . . . . . .
إذا كانت العينة تحتوي على شوائب يمكن الكشف عنها بواسطة قياس الألوان ( BCA ، برادفورد ) أو مزدوجة الطول الموجي ( 280nm / 340nm ) .
صيانة الأجهزة
مصدر الضوء : تجنب التعرض لفترة طويلة ، إيقاف تشغيل مصدر الضوء عندما لا تستخدم لإطالة أمد الحياة .
موحدات اللون : استبدال المجففة ( مثل هلام السيليكا ) بانتظام لمنع عناصر التشتت من الحصول على الرطب والعفن .
الكاشف : يمنع الضوء الساطع من التعرض المباشر أو الرطوبة من تراكم الغبار ، والحفاظ على نظافة .
البيئة : الصك ينبغي أن توضع على طاولة ثابتة وجافة ، بعيدا عن منفذ الهواء من أجهزة تكييف الهواء أو أشعة الشمس المباشرة ، التحكم في درجة الحرارة في 25 ℃ ± 2 ℃ . . . . . . .
معالجة العينات الخاصة
التكثيف عينة : استخدام 45 درجة يميل إلى عصا الجدار ببطء التحميل لمنع تجاوز أو نيوتن حلقة تدخل .
السكريات : بعد الكشف عن الكحول الكاشف يجب أن تستخدم شطف السائل الطريق لتجنب بقايا .
عينة من النفط : إذا كان هناك ظاهرة العائمة ، تحتاج إلى درجة حرارة منخفضة الطرد المركزي فصل قبل الكشف .
رابعاً - تطبيق السيناريوهات والمزايا
سريع الكمية : لا تحتاج إلى المعالجة المعقدة ، 2-5 دقائق لإكمال الكشف عن تدفق عالية الفرز .
microdetection : فقط 0.5-2 ميكرولتر من العينات المطلوبة لتوفير قيمة العينات ( مثل العينات السريرية ، البروتينات النادرة ) .
multiparameter التحليل : جزء من الصك يدعم الكشف المتزامن a260 ( الحمض النووي ) ، a280 ( البروتين ) و od600 ( تركيز البكتيريا ) لتحقيق متعدد المكونات الكمية .
قابلية : تصميم مدمج , مناسبة لأنّ تفتيش موقعيّة أو معمل متنقل .