الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة الترشيح هو عملية إثراء الكائنات الحية الدقيقة في العينات الفيزيائية أو الكيميائية ، ثم عزل وتشخيص الكائنات الحية الدقيقة المستهدفة . هذه الطريقة يمكن تطبيقها على نطاق واسع في مجالات مثل الكشف عن نوعية المياه ، عقامة الكشف عن المخدرات الكشف عن الكائنات المشتركة تشمل البكتيريا ( على سبيل المثال ، كولاي ، المكورات العنقودية الذهبية ) ، والفطريات ( على سبيل المثال ، العفن والخميرة ) وهلم جرا . عزل وتشخيص دقيق هو المفتاح لضمان موثوقية نتائج الاختبار .
طريقة الترشيح وفصل الكائنات الحية الدقيقة
عينة المعالجة والترشيح
الترشيح الميكروبي عادة ما يستخدم غشاء الترشيح ( وسط ) طريقة مناسبة لأنّ عينة السائل ( مثل الماء أو الشراب ) . الخطوات هي كما يلي :
1 . إعداد العينة : تجانس السائل أو عينة صلبة ( مثل المواد الغذائية تحتاج إلى تمييع متجانس ) .
2 . الترشيح : الكائنات الحية الدقيقة التي تم اعتراضها من خلال غشاء الترشيح مع 0.22-0.45 ميكرون حجم المسام .
3 - نقل : نعلق على غشاء الترشيح انتقائية أو غير انتقائية متوسطة الثقافة .
2-2 تقنيات الفصل الانتقائي
الكائنات الحية الدقيقة المختلفة تحتاج إلى استخدام وسائل الإعلام الخاصة والظروف الثقافية :
البكتيريا
- كولاي : استخدام أيه إم بي ( أجار أحمر الميثيلين الأزرق ) أو ماكونكي أجار ( ماكونكي أجار ) .
- المكورات العنقودية الذهبية : استخدام المانيتول عالية الملح أجار ( MSA ) .
الفطريات
- العفن والخميرة : استخدام أجار الجلوكوز ساليسلر ( SDA ) ، إضافة المضادات الحيوية لمنع نمو البكتيريا .
تحديد التكنولوجيا الميكروبية
تحديد المورفولوجية
- خصائص المستعمرات : مراقبة شكل المستعمرات ( الحجم ، اللون ، الحافة ، نسيج السطح ) .
- إذا كانت المكورات العنقودية الذهبية تظهر ذهبية وسلسة محدبة؛ مستعمرة العفن هو زغبي .
- الفحص المجهري : تلطيخ جرام ( التفريق بين ز ⁺ / ز ⁻ البكتيريا ) ، بوغ تلطيخ .
3-2 الاختبارات البيوكيميائية
تحديد السلالات من خلال الخصائص الأيضية :
- اختبار أوكسيديز : يميز الزائفة ( إيجابية ) من انتروباكتر ( السلبية ) .
- IMVIC اختبار : تحديد كولاي ( نتيجة وضع + - ) .
- اختبار تخمر السكر : مثل القدرة على تخمر اللاكتوز لتمييز الإشريكية القولونية عن السالمونيلا .
طرق البيولوجيا الجزيئية
تسلسل الحمض النووي الريبي : 16srrna " المعيار الذهبي " لتحديد البكتيريا التي يمكن أن تصل إلى مستوى جنس أو نوع .
تقنية PCR : التضخيم والكشف عن جينات معينة ( مثل uida الجينات في القولونية ) .
maldi-tofms : التعرف السريع على الكائنات الحية الدقيقة من البروتين البصمات .
تطبيق التحدي
4-1 التطبيق العملي
- رصد نوعية المياه : الكشف عن مجموع البكتيريا المسببة للأمراض ( مثل الفيلقية ) في المياه .
- فحص عقامة الأدوية : التأكد من أن الحقن والمنتجات البيولوجية خالية من التلوث الميكروبيولوجي .
- سلامة الأغذية : الكشف عن السالمونيلا والليستيريا في الأغذية .
4-2 التحديات التقنية
1 - الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة مع انخفاض وفرة : الكائنات الحية الدقيقة في العينة يجب أن تكون غنية في الثقافة .
2 . البكتيريا تدخل : انتقائية متوسطة الثقافة يجب أن يكون الأمثل في عينات معقدة ( مثل البراز والتربة ) .
3 - تحديد الاحتياجات السريعة : الأساليب التقليدية تستغرق وقتا طويلا ، تحتاج إلى تعزيز التكنولوجيا البيولوجية الجزيئية .