كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء العمود ( HPLC العمود ) هو عنصر أساسي من عناصر عالية الأداء اللوني السائل ، وظيفتها الرئيسية هي استخدام العمود الكروماتوجرافى ثابتة ( وجبات الكروماتوغرافي ) و المرحلة المحمول ( المذيبات التي تحمل عينات ) بين التوزيع ، والامتزاز ، والتبادل الأيوني ، الاستبعاد أو تقارب الاختلافات ، عينة معقدة من المكونات في كفاءة عالية ، سريعة ودقيقة الانفصال ، متابعة التحليل النوعي ( مثل تحديد أنواع المكونات ) والكمي ( مثل تحديد محتوى المكونات ) . ويمكن تقسيم المهام المحددة إلى المستويات الأساسية الثلاثة التالية :
فصل مكونات العينة المعقدة
هذا هو جوهر العمود الكروماتوجرافى . عندما حل العينة التي تحتوي على العديد من المكونات ( بعد حقن العينة ) يدخل العمود الكروماتوجرافى جنبا إلى جنب مع المرحلة المحمول ، وكثافة التفاعل بين مكونات مختلفة و مرحلة ثابتة و المرحلة المحمول مختلفة :
المكونات التي هي قريبة من بعضها البعض بقوة ثابتة طويلة الوقت الإقامة في العمود .
فائدة نموذج يحتوي على مزايا قصيرة الوقت الإقامة ، وارتفاع سرعة التدفق ، وضعف القوة النسبية الثابتة التي يرجع تاريخها ، من السهل أن تذوب في مكونات المرحلة المحمول .
من خلال هذا " الهجرة التفاضلية " تأثير المكونات التي كانت مختلطة في الأصل كانت مفصولة عن بعضها البعض لتشكيل كل فصل الكروماتوغرافي القمم ، وبالتالي تحقيق فصل من " خليط " إلى " عنصر واحد " .
على سبيل المثال ، عند تحليل المكونات النشطة والشوائب في المخدرات ، العمود الكروماتوجرافى يمكن فصل الشوائب الدقيقة من المكونات الرئيسية ، وتجنب التدخل المتبادل .
تحديد كفاءة الفصل و الأداء التحليلي
هيكل العمود الكروماتوجرافى ( مثل طول العمود ، القطر الداخلي ) ، مرحلة ثابتة الخصائص ( مثل حجم الجسيمات ، حجم المسام ، تعديل المواد الكيميائية ) مباشرة تحديد كفاءة الفصل ، القرار والانتقائية :
كفاءة الفصل : حشو مع حجم الجسيمات الصغيرة ( على سبيل المثال ، 2-5 ميكرون ) يمكن أن تزيد من مساحة السطح من مرحلة ثابتة ، وزيادة وتيرة التفاعل بين مكونات المرحلة الثابتة ، وتحقيق كفاءة الفصل .
القرار : معقولة طول العمود ( على سبيل المثال ، 150mm ، 250mm ) و التركيب الكيميائي مرحلة ثابتة ( على سبيل المثال ، C18 عكس المرحلة العمود ، العمود العادي الأمينية ) يمكن أن تزيد من فصل الكروماتوغرافي القمم من المكونات المجاورة ، وتجنب تداخل القمم .
الانتقائية : مناسبة مرحلة ثابتة ( على سبيل المثال ، التبادل الأيوني العمود لفصل الأحماض الأمينية ، هلام العمود لفصل البروتين ) تم اختيارها وفقا لأنواع مختلفة من العينات ( على سبيل المثال ، قطبية ، غير قطبية ، الأيونية نوع ) .
دقة التحليل النوعي والكمي
بعد فصل عنصر يمر من خلال العمود الكروماتوجرافى ، فإنه يدخل في الكاشف ( مثل الأشعة فوق البنفسجية كاشف ، كاشف الطيف الكتلي ) لتوليد إشارة .
التحليل النوعي : تحديد ما إذا كان العنصر المستهدف موجود في العينة على أساس " الاحتفاظ الوقت " ( مقارنة مع معيار المنتج ) .
التحليل الكمي : التركيز في عينة يمكن حسابها بدقة حسب المنطقة أو ارتفاع الكروماتوغرافي الذروة ، جنبا إلى جنب مع معيار المنحنى .
إذا كان العمود الكروماتوجرافى فصل تأثير الفقراء ( مثل ذروة التداخل ، زائدة عن الحاجة ) ، وسوف يؤدي مباشرة إلى سوء التقدير النوعي والكمي نتائج غير دقيقة ، حتى أداء العمود الكروماتوجرافى هو المفتاح لضمان موثوقية التحليل .