مضان الكمية PCR ( fq-pcr ) محلل يستخدم في الوقت الحقيقي رصد التغيرات في إشارة مضان ، جنبا إلى جنب مع CT قيمة المنحنى القياسي التحليل .

المبدأ الأساسي

مضان مجموعات ( مثل سيبر الأخضر صبغ أو تاكمان التحقيق ) أضيفت إلى نظام PCR التضخيم ، مما يجعل كثافة مضان إشارة متزامنة مع كمية من تضخيم المنتج . في كل دورة الاسترداد ، مضان إشارة تم جمعها و تضخيم منحنى تم إنشاؤها . عن طريق تحديد عتبة مضان ( عادة 10 مرات الانحراف المعياري من خط الأساس إشارة ) ، عدد من الدورات ( CT ) من تضخيم المنتج عند عتبة محددة . CT قيمة عكسياً مع بداية القالب ، وهذا هو ، أكثر من بداية القالب ، أصغر CT القيمة .

خطوات التنفيذ

منحنى القياسية البناء : التدرج تمييع باستخدام معيار معروف التركيز ( على سبيل المثال ، تنقية الحمض النووي البلازميد أو في المختبر النسخ الحمض النووي الريبي ) و PCR التضخيم مع تركيزات مختلفة من معيار قالب . منحنى القياسية هو رسمها باستخدام لوغاريتمي عدد النسخ القياسية الإحداثي السيني و CT قيمة الإحداثي الطولي . عندما يكون تركيز مجموعة من المنتجات القياسية هو 10 - 10 ⁰ عدد النسخ ، قالب التركيز عادة ما تظهر علاقة خطية جيدة مع CT قيمة ( معامل الارتباط ص ² > 0.99 ) لضمان دقة القياس في هذا النطاق .

المجهول : الكشف عن عينة غير معروفة مع معيار التضخيم في وقت واحد ، وفقا لقيمة التصوير المقطعي في منحنى القياسية صيغة لحساب عدد نسخ الجينات المستهدفة في العينة . على سبيل المثال ، إذا كان معيار منحنى الصيغة ص = 3.1372x + 38.201 ( ص هو CT ، س هو عدد النسخ اللوغاريتم ) ، يمكننا الحصول على عينة من خلال عكس حساب القالب الأولي .

عندما يكون هناك حاجة إلى مقارنة الاختلافات في التعبير الجيني بين عينات مختلفة ، ونحن اختيار بتلر الجينات ( على سبيل المثال ، gapdh β - أكتين ) مثل المعلمة الداخلية ، وحساب الفرق بين قيمة الاشعة ( Δ CT ) الجينات المستهدفة و المعلمة الداخلية الجينات .