التلقائي بالكامل نظام لطخة ويسترن ( لطخة ويسترن ) هو جهاز أوتوماتيكي للكشف عن وتحليل البروتين ، والتي يتم تطبيقها على نطاق واسع في مجالات علوم الحياة ، والتشخيص السريري ، وتطوير الأدوية ، وهلم جرا . اختراع يمكن تلقائيا إكمال خطوات فصل البروتين ، الكهربي ، غشاء نقل ، الختم ، احتضان الأجسام المضادة ، مما يجعل اللون ، وما إلى ذلك ، من أجل تحسين كفاءة التجربة والحد من الأخطاء في التشغيل اليدوي . وفيما يلي المبادئ التقنية لهذا النظام .
1 . فصل البروتين ( صفحة الحزب الديمقراطي الصربي الكهربائي )
المبدأ : البروتين هو فصل في المجال الكهربائي حسب الوزن الجزيئي . البروتين في العينة كانت تعامل مع الحزب الديمقراطي الصربي ( دوديسيل كبريتات الصوديوم ) ، مما أدى إلى شحنة سالبة و التشويه والتحريف . بعد ذلك ، يتم تحميل العينة في هلام ، عندما يتم تطبيق المجال الكهربائي ، والبروتين سوف تهاجر في هلام وفقا لحجم جزيء ، أصغر البروتينات تهاجر بسرعة أكبر من البروتينات تهاجر ببطء .
التشغيل الآلي : في كامل تلقائي نظام البصمة الجزيئية ، هذه العملية تتم من قبل وحدة الكهربائي التلقائي ، والتي يمكن تلقائيا إضافة عينة ، وتنظيم ظروف الكهربائي ، وتوقيت إنهاء التجربة ، وهلم جرا .
2 - نقل غشاء ( نقل البروتين )
المبدأ : البروتينات التي تم فصلها عن طريق الكهربائي تحتاج إلى نقلها إلى الأغشية الصلبة ( مثل PVDF الأغشية أو الأغشية النيتروسليلوز ) بعد الكشف . نقل البروتينات من الهلام إلى الغشاء ، وعادة عن طريق النقل الكهربائي . كفاءة النقل هو وثيق الصلة مع اختيار الفيلم الحالي والوقت .
التشغيل الآلي : التلقائي نظام البصمة يمكن التحكم تلقائيا الجهد والوقت من الغشاء ، ورصد تأثير نقل في الوقت الحقيقي أثناء التجربة ، وضمان نقل كامل من البروتين .
3 - الإغلاق
المبدأ : بعد تحويل الغشاء ، الغشاء يجب أن تكون مغلقة من أجل تجنب غير محددة ملزمة . عادة ، 5 ٪ مسحوق الحليب الخالي من الدسم أو جيش صرب البوسنة الحل يستخدم في عملية الإغلاق لإغلاق الفجوة في الغشاء لمنع الأجسام المضادة من غير ملزمة على وجه التحديد إلى الغشاء .
الأتمتة : يمكن للنظام تلقائيا إضافة ختم السائل ، والسيطرة على الحضانة الوقت ودرجة الحرارة ، وضمان الاتساق في عملية الإغلاق .
4 - احتضان الأجسام المضادة
المبدأ : هذه الخطوة تنطوي على استخدام الأجسام المضادة المحددة للكشف عن البروتينات المستهدفة . أولا ، يتم احتضانها باستخدام الأجسام المضادة الأولية ضد البروتين المستهدف ، ثم يتم استخدام الأجسام المضادة الثانوية قادرة على التعرف على الأجسام المضادة الأولية مع الكشف عن العلامات ( مثل انزيم أو fluorogenic المجموعات ) .
التشغيل الآلي : التلقائي نظام البصمة يمكن أن تضاف تلقائيا إلى حل الضد ، ضبط الوقت ودرجة الحرارة الحضانة ، وغسل سطح الغشاء تلقائيا لإزالة الأجسام المضادة غير الملزمة ، والحد من الضوضاء في الخلفية .
5 . غسل
المبدأ : بعد احتضان الأجسام المضادة ، وعادة ما يكون هناك بعض الأجسام المضادة غير ملزمة المخلفات على الغشاء . غسل خطوة يزيل هذه الأجسام المضادة غير الملزمة والشوائب من خلال حل العازلة للحد من إشارة الخلفية وتحسين الكشف عن خصوصية .
التشغيل الآلي : نظام التشغيل الآلي يمكن أن تضاف تلقائيا إلى سائل الغسيل ، وغسل عدة مرات حسب الحاجة ، لضمان تنظيف سطح الفيلم ، والحد من خلفية التدخل .
6 . اللون أو الكشف عن مضان
المبدأ : بعد احتضان الأجسام المضادة ، والكشف عن البروتينات المستهدفة عادة ما يعتمد على إنتاج اللون أو إشارات الفلورسنت . وتشمل أساليب الكشف الشائعة ما يلي :
تشيميلومينيسسينسي ( ECL ) : الأجسام المضادة الثانوية عادة ما تحتوي على الإنزيمات ( مثل برنامج الصحة الإنجابية أو أب ) التي تتفاعل مع الركيزة ، والإفراج عن الإشارات الضوئية التي يتم الكشف عنها بواسطة الأجهزة البصرية .
طريقة الكشف عن مضان : إذا كان استخدام الأجسام المضادة الفلورسنت المسمى ، نظام الكشف عن الطول الموجي محددة من الضوء من خلال الإثارة والتقاط تنبعث منها إشارات الفلورسنت .
الأتمتة : التلقائي نظام البصمة الجزيئية تلقائيا إضافة لون الركيزة ، التحكم في وقت رد الفعل ، واستخدام نظام التصوير المتكامل للكشف .
7 - تحليل البيانات وإعداد التقارير
المبدأ : من خلال تحليل الصور البرمجيات ، لون أو إشارة مضان يمكن كميا ، والتعبير عن البروتين المستهدف يمكن تحديدها . وعادة ما يتم ذلك عن طريق مقارنة سطوع أو كثافة مضان من البروتين العصابات في العينة مع معيار تركيز معروف للتحليل الكمي .
الأتمتة : المدمج في نظام تحليل البيانات البرمجيات يمكن تلقائيا معالجة الصور ، وتوليد التقارير ، بما في ذلك البروتين التعبير ، الوزن الجزيئي الشريط ، عينة المقارنة ، وهلم جرا .
الخصائص التقنية
التلقائي بالكامل : التلقائي نظام البصمة يمكن إكمال سلسلة من العمليات ، بما في ذلك فصل البروتين ، الكهربائي ، غشاء نقل ، الختم ، احتضان الأجسام المضادة ، والغسيل ، اللون ، وما إلى ذلك ، إلى حد كبير في تحسين كفاءة التجربة والتكرار .
تدفق عالية : نظم التشغيل الآلي الحديثة يمكن التعامل مع عينات متعددة في وقت واحد ، ومناسبة على نطاق واسع التجارب .
دقة التحكم : النظام يمكن التحكم بدقة في الوقت ، درجة الحرارة ، رد فعل الشرط في كل خطوة تجريبية ، والحد من الأخطاء التشغيلية .
معالجة البيانات وتحليلها : صورة متكاملة تحليل البرمجيات تلقائيا يمكن تحليل النتائج التجريبية ، وتوفير أكثر دقة البيانات المكررة .
من السهل أن تعمل : يحتاج المستخدم فقط إلى مجموعة بسيطة من المعلمات التجريبية ، سيقوم النظام تلقائيا إكمال العملية برمتها ، وتوليد تقارير مفصلة ، والحد من عملية معقدة .
ملخص
التلقائي نظام البصمة يمكن أن تحسن كثيرا من كفاءة ودقة البيانات التجريبية من خلال المعالجة التلقائية لكل خطوة تجريبية . التكنولوجيا الأساسية تشمل مبدأ فصل البروتين ، electrotransfer الضد , الحضانة , لون أو مضان الكشف ، وما إلى ذلك كل خطوة يتم التحكم بدقة والأمثل ، والتي هي مناسبة للكشف عن البروتين مع تدفق عالية ومنخفضة الخطأ .