التلقائي نظام لطخة ويسترن هو أداة فعالة للكشف عن كمية معينة من البروتين في العينات البيولوجية . هذا النظام يجمع بين العديد من تقنيات التشغيل الآلي لتحسين التكرار والدقة والكفاءة . وفيما يلي شرح كامل تلقائي لطخة غربية تقنية التهجين .
تكوين النظام
نموذج إعداد وحدة
عينة وحدة المعالجة : بما في ذلك الانحلال الحراري ، والتركيز ، تمييع العينة ، وعادة مع أجهزة الطرد المركزي بالموجات فوق الصوتية محطم .
التحليل الكمي : وحدة قياس تركيز البروتين باستخدام الإجار أو غيرها من المعدات التحليلية .
وحدة الكهربي
هلام بولياكريلاميدي الاستشراب المعدات : عادة ما تكون متكاملة في نظام التشغيل الآلي ، والتي يمكن تلقائيا تحميل العينة في هلام بولياكريلاميدي الاستشراب ، والسيطرة على الظروف ( الحالية ، والجهد ، الوقت ، الخ . )
وحدة نقل
غشاء نقل الجهاز : نقل البروتينات الكهربي إلى PVDF أو النتروسليلوز الغشاء ، وذلك باستخدام طريقة نقل الكهرباء أو الرطب نقل . نظام أوتوماتيكي بالكامل يمكن التحكم بدقة نقل الوقت والجهد .
إغلاق وحدة الحضانة
نظام حقن السائل المغلق : يستخدم لمنع غير محددة ملزمة ، تلقائيا إضافة السائل المغلق و الحضانة .
احتضان الأجسام المضادة وحدة : تلقائيا إضافة واحد واثنين من الأجسام المضادة ، وضمان احتضان موحدة .
وحدة الغسيل
التلقائي نظام الغسيل : مضخة غسل العازلة تلقائيا غسل الغشاء عدة مرات لإزالة الأجسام المضادة غير الملزمة .
وحدة الكشف
نظام رد فعل اللون : عادة ما تكون متكاملة تشيميلومينيسسينسي أو قياس الألوان وحدة الكشف تلقائيا إضافة الركيزة ورصد رد الفعل .
نظام التصوير : كاميرا عالية الدقة تستخدم لالتقاط الصور من شريط البروتين وإجراء تحليل لاحق .
برامج تحليل البيانات
تحليل البرمجيات التي ترتبط مع الجهاز تلقائيا يمكن معالجة البيانات ، بما في ذلك كمية البروتين ، وتحليل نتائج الشريط الناتج .
ثانياً - مبدأ العمل
مبدأ التشغيل التلقائي نظام هجين لطخة غربية يمكن تقسيمها إلى الخطوات التالية :
إعداد العينة
البروتين المستخرج من الخلايا أو الأنسجة و تركيز البروتين يتحدد كميا .
فصل الكهربي
عينات من هلام بولياكريلاميدي الاستشراب صفحة الحزب الديمقراطي الصربي ، وفقا لحجم البروتين عزل البروتينات المختلفة .
عملية نقل
البروتينات المعزولة يتم نقلها إلى الغشاء بواسطة المجال الكهربائي على شكل مطبوع .
إغلاق الحضانة
الغشاء هو تعامل مع السائل المغلق لمنع غير محددة ملزمة ، ثم واحد و اثنين من الأجسام المضادة هي المحتضنة تباعا .
خطوات الغسيل
غسل الغشاء عدة مرات لإزالة الأجسام المضادة غير الملزمة ، والحد من الضوضاء في الخلفية .
الكشف عن التصوير
إضافة الركيزة إلى جعل رد فعل اللون ، وذلك باستخدام نظام التصوير لالتقاط صورة البروتين الشريط .
معالجة البيانات
تحليل البرمجيات المستخدمة في معالجة الصور ، البروتين التعبير الكمي ، وتوليد التقارير .
ثالثاً - المزايا التقنية
تدفق عالية
النظام الآلي يمكن التعامل مع العديد من العينات في وقت واحد ، وتحسين الكفاءة التجريبية ، ومناسبة على نطاق واسع الفرز .
تكرار قوي
التشغيل الآلي يقلل من الأخطاء البشرية ، ويعزز تكرار وموثوقية النتائج التجريبية .
إدارة البيانات
تحليل البيانات البرمجيات يمكن تحقيق التلقائي تجهيز البيانات وتسجيل البيانات وحفظها وتحليلها .
كفاءة الوقت
أتمتة عملية تقصير كبير في وقت التجربة ، بحيث يمكن للباحثين الحصول على نتائج أسرع .
مراقبة دقيقة
كل معلمة ( مثل درجة الحرارة ، والوقت ، والتركيز ، وما إلى ذلك ) في النظام يمكن التحكم بدقة و الظروف التجريبية الأمثل .
رابعاً - مجالات التطبيق
البحوث الأساسية : تستخدم في البحث عن وظيفة البروتين ، وتحليل مسارات تنبيغ الإشارة ، الخ .
التشخيص السريري : تستخدم للكشف عن ورصد علامات المرض .
تطوير الأدوية : تقييم تأثير المخدرات على البروتين التعبير .
دراسة النباتات والحيوانات المعدلة وراثيا : الكشف عن البروتينات التي أعرب عنها في التحوير .
ملخص
التلقائي نظام هجين لطخة غربية يمكن أن تحسن كثيرا من كفاءة ودقة الكشف عن البروتين من خلال دمج العديد من تقنيات التشغيل الآلي . وقد تم تطبيقها على نطاق واسع في مجال علوم الحياة و التشخيص السريري . من خلال التطوير المستمر والتحسين ، هذه النظم سوف تدفع المزيد من التقدم في مجال الطب الحيوي .