التلقائي بالكامل لطخة ويسترن ( لطخة ويسترن ) هو تقنية تجريبية تستخدم على نطاق واسع في مجال الطب الحيوي ، علم أحياء الخلية وعلم الأحياء الجزيئي ، وتستخدم أساسا للكشف عن وجود كمية معينة من البروتين ، والتعبير عن تعديل الدولة من البروتين . هذا الأسلوب يجمع بين فصل الكهربي و المقايسات المناعية ، ويستخدم الأجسام المضادة المحددة لتحديد البروتينات المستهدفة .
المبدأ الأساسي التلقائي لطخة غربية :
إعداد العينة :
مجموع البروتينات المستخرجة من الخلايا والأنسجة ، أو السوائل في الجسم ، وعادة ما يتم تقسيم الخلايا باستخدام تقسيم العازلة .
البروتين المستخرج كان كميا بواسطة BCA أو برادفورد الأسلوب .
صفحة الحزب الديمقراطي الصربي الكهربائي :
البروتينات في العينة كانت مفصولة الوزن الجزيئي . التلقائي بالكامل ايمونوبلاتينگ الصك عادة لديه وظيفة التلقائي الكهربائي ، ويمكن تشغيل صفحة الحزب الديمقراطي الصربي الكهربائي بكفاءة وثابت .
بعد الانتهاء من عملية الكهربي ، البروتين سوف تهاجر إلى هلام حسب الحجم .
تحويل الفيلم :
البروتينات المعزولة من صفحة الحزب الديمقراطي الصربي تم نقلها إلى بولي ( vinylidene الفلوريد ( PVDF ) الأغشية أو الأغشية النيتروسليلوز . . . . . . . عادة ما تستخدم في عملية النقل الكهربائي غشاء غشاء البروتين لضمان التثبيت .
غشاء مغلق
الغشاء بعد التحويل يجب أن تكون مغلقة مع ختم السائل ( عادة 5 ٪ مسحوق الحليب الخالي من الدسم أو جيش صرب البوسنة العازلة ) لمنع الأجسام المضادة غير محددة ملزمة غير المستهدفة على الغشاء .
احتضان الأجسام المضادة :
احتضان الغشاء مع الأجسام المضادة ( الأجسام المضادة المحددة ضد البروتين المستهدف ) . الحضانة الوقت ودرجة الحرارة يجب أن تنظم وفقا لمتطلبات الأجسام المضادة .
الغشاء ثم احتضنت مع الأجسام المضادة ( عادة انزيم المسمى الأجسام المضادة التي تربط الأجسام المضادة ) التي يمكن أن تعزز إشارة وجعل الكشف اللاحقة أكثر حساسية .
كشف الإشارة
وأخيرا ، فإن الإشارات التي تربط الأجسام المضادة إلى البروتين المستهدف يتم الكشف عنها من قبل رد فعل الركيزة ( على سبيل المثال ، تشيميلومينيسسينسي أو قياس الألوان ) ، وعادة ما تستخدم تشيميلومينيسسينسي الكشف عن النظام .
نظام التشغيل الآلي يمكن أن تؤدي تلقائيا تعزيز إشارة ، والتعرض ، والتقاط الصور حسب الوقت المحدد وكثافة .
ميزة وميزة من آليّة [ بروتين - وسترن ] جهاز :
الكفاءة والأتمتة :
كامل تلقائي ايمونوبلاتينگ الصك يمكن إكمال سلسلة من العمليات ، بما في ذلك تحميل العينة ، تشغيل الكهربائي ، تحويل الغشاء ، احتضان الأجسام المضادة للكشف عن النتائج ، مما يحسن إلى حد كبير كفاءة التجربة ويقلل من الأخطاء الناجمة عن دليل التشغيل .
دقة التحكم والاستقرار :
النظام الآلي يمكن التحكم بدقة المعلمات التجريبية ، مثل درجة الحرارة ، والوقت ، تركيز الأجسام المضادة ، وما إلى ذلك ، لضمان التكرار والاستقرار في كل خطوة .
الحد من الأخطاء البشرية :
التلقائي أداة يمكن أن تقلل من التدخل البشري في التجربة ، وضمان الاتساق في العملية ، ولا سيما في تدفق عالية التجربة ، وتحسين موثوقية النتائج .
هذا العلاج مع تدفق عالية ومتنوعة :
كامل تلقائي ايمونوبلاتينگ الصك يمكن التعامل مع العديد من العينات في وقت واحد ، وهو ينطبق على التجارب التي تتطلب تحليل تدفق عالية ، مثل فحص المخدرات ، الفحص السريري ، الخ .
التكامل متعدد الوظائف :
العديد من السيارات الحديثة ايمونوبلاتينگ الصكوك أيضا دمج وظائف أخرى ، مثل الكهربائي ، غشاء ، احتضان الأجسام المضادة ، إشارة الكشف ، وما إلى ذلك ، يمكن للمستخدمين إجراء عمليات مخصصة حسب الحاجة .
مجال التطبيق :
تحليل البروتين التعبير :
فائدة نموذج يستخدم في التحليل الكمي عن مستوى بعض البروتينات المحددة في الخلايا أو الأنسجة ، ولا سيما في مجال أبحاث السرطان والجهاز المناعي ، الخ .
دراسة تعديل البروتين :
الهدف : دراسة تأثير هذه التعديلات على وظيفة البروتين من خلال الكشف عن الفسفرة ، أستلة ، ارتباط بالغليكوزيل من البروتينات .
دراسات مرضية
في تشخيص المرض ، لطخة غربية يمكن الكشف عن البروتينات المحددة المرتبطة بالمرض ، مثل علامات العدوى الفيروسية مثل فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد الوبائي ( ب ) .
تطوير الأدوية وفحصها :
في الدراسات الدوائية ، لطخة ويسترن غالبا ما تستخدم لتقييم تأثير المخدرات على بروتين معين في التعبير .
البحوث الأساسية :
لطخة ويسترن هو أداة هامة في علم الأحياء الجزيئي لدراسة تنظيم التعبير الجيني و مسارات الإشارات الخلوية .
ملخص
التلقائي بالكامل لطخة ويسترن هو أداة تستخدم على نطاق واسع في بحوث علوم الحياة ، والتشخيص الطبي ، والصناعات الدوائية . من خلال عملية تلقائية ، تدفق وتكرار التجربة هي تحسنت كثيرا ، خطأ بشري هو انخفاض ، وأكثر استقرارا منصة التجريبية المقدمة للباحثين .