أولاً - مقدمة

• SF9خلايا الحشرات هي واحدة من أهم خطوط الخلايا حقيقية النواة المستمدة من أنسجة المبيض من دودة القز الشرنقة . مبدأ الثقافة هو محاكاة البيئة الفسيولوجية ( درجة الحرارة المناسبة ، والتغذية ، وتبادل الغازات ) في الحشرات من أجل دعم تكاثر الخلايا و استضافة بکیولوویروس ، وبالتالي تحقيق مستوى عال من البروتين المؤتلف التعبير .

التكوين المشترك :

• درجة الحرارة27℃

• سرعة الدوران120-140 دورة في الدقيقةتعليق الثقافة

ثانياً - تفاصيل البرنامج

• مشهد نموذجي

SF9أهم التطبيقات الخلوية المرتبطة بکیولوویروس نظام التعبير ، مثلباك إلى باكهو أداة هامة في مجال المستحضرات الصيدلانية البيولوجية والبحوث الأساسية في التعبير عن البروتينات المؤتلف المعقدة ، مثل جزيئات الفيروس واللقاحات المستضدات على مستوى عال .

• معلمات التكوين والمبادئ :

درجة الحرارةSF9خلية ثقافة درجة الحرارة يجب أن تكون تحت رقابة صارمة26-28درجة مئوية ، وعادة ما تكون مجموعة27سي . هذا هو لأن درجة الحرارة المثلى لنمو الخلايا المشتقة من الحشرات أقل بكثير من خلايا الثدييات . درجة الحرارة هي العامل الرئيسي الذي يؤثر على نمو الخلايا والبروتين التعبير .30الإجهاد الحراري ، والركود ، وحتى الموت على نطاق واسع ، مما يؤدي إلى ضرر لا رجعة فيه . ولذلك ، معايرة درجة الحرارة والرصد المستمر حاضنة

سرعة الدورانفي تعليق الثقافة ، تناوب السرعة120إلى140 دورة في الدقيقةمجموعة . هذه السرعة يمكن أن تضمن تعليق الخلايا في المتوسط ، وتجنب الترسيب ، مع توفير ما يكفي من تبادل الغازات ( نقل الأوكسجين ) لنمو الخلايا . انخفاض سرعة الدوران يؤدي إلى تراكم الخلايا و نقص الأكسجة . عالية جدا يمكن أن تنتج الكثير من قوة القص ، مما تسبب في تلف الخلايا الميكانيكية . وبالإضافة إلى ذلك ، من أجل ضمان كفاءة تبادل الغازات ، حجم الثقافة عموما لا تتجاوز2 / 5منتدى

• نقاط الاهتمام والتشغيل :

حملSF9عند زراعة الخلايا ، الروابط التالية تتطلب اهتماما خاصا :

1. درجة الحرارة والحساسية :SF9الخلايا هي حساسة جدا لدرجة الحرارة . ثقافة درجة الحرارة يجب أن لا تكون أعلى من30درجة مئوية ، وإلا فإنه سوف يؤدي إلى تلف الخلايا لا رجعة فيه . حتى في فترة قصيرة من الانفصال ، مثل الانتعاش ، ينبغي أن تكتمل في أقرب وقت ممكن لتجنب التعرض لفترات طويلة في درجة حرارة الغرفة أو أعلى .

2. تجنب الأضرار الميكانيكية :SF9الخلايا الحساسة إلى القوة الميكانيكية مثل ضربة ، فقاعة ، الخ . جميع العمليات ، مثل إعادة تعليق ، مرور ضربة ، يجب أن تكون لينة ، قدر الإمكان ، لتجنب توليد الكثير من الفقاعات للحفاظ على حيوية عالية من الخلايا .

3. ملاحظة مورفولوجيا الخلية :في عملية الثقافة ، لوحظ أن هناك بعض الجزيئات السوداء في الخلايا التي تنتمي إلى ظاهرة طبيعية . بعض الخلايا قد تمتد هوائيات أطول بعد فترة من الوقت في ثقافة ملتصقة ، والتي ليست ملوثة أو في حالة سيئة . إذا كان هناك المزيد من الحطام خارج الخلية ، يمكن إزالتها عن طريق الطرد المركزي في سرعة منخفضة .

4. الإنعاش والتجميد :بعد الانتعاش24استبدال وسائل الإعلام الجديدة في غضون ساعة لإزالة المواد الضارة من الخلايا الميتة . من أجل ضمان جودة البذور بنك الاحتياطي الفيدرالي ، فمن المستحسن استخدام مربع التبريد المبرمجة أثناء الحفظ بالتبريد ، والتحقق من نشاط الخلايا المخزنة بانتظام .

ثالثاً - مصادر الوثائق

1. O'Reilly, D. R., Miller, L. K., & Luckow, V. A. (1992). ناقلات التعبير عن Baculovirus: دليل مختبر. شركة W.H. Freeman and Company

   هذا الكتاب هو نظام التعبير بکیولوویروس مجال الدليل الكلاسيكي ، بما في ذلك تفاصيلSF9علم الأحياء الأساسي ، طريقة زراعة ، تعداء والعدوى تجربة تدفق الحشرات خط الخلية .

2. Luckow، V. A., & Summers، M. D. (1988). الاتجاهات في تطوير ناقلات التعبير عن فيروس الباكولوفيروس. * التكنولوجيا الحيوية، 6*(1)، 47-55.

   هذه المادة ذات التأثير العالي استعراض التقدم المحرز في تطوير ناقلات بکیولوویروسSF9خطوط الخلايا في نظام التحسين .