وقف تدفق الطيف هو نوع من التكنولوجيا التحليلية المستخدمة في دراسة حركية التفاعل السريع ، الذي هو جوهر لتحقيق سرعة خلط المواد المتفاعلة و وقف تدفق لحظي ، ورصد عملية التفاعل في الوقت الحقيقي من خلال الإشارات الضوئية . وفيما يلي شرح مفصل لمبادئ عملها وتفاصيل استخدامها :

مبدأ العمل

1 - نظام خلط سريع : وحدة خلط مطياف توقف تدفق عادة ما تكون مدفوعة من قبل اثنين من المحاقن أو الأجهزة التي تعمل بالهواء المضغوط ، واثنين من المواد المتفاعلة ( مثل الكواشف أ و ب ) من خلال فوهة أو غرفة الخلط لخلط عالية السرعة . خلط الوقت يمكن أن تكون قصيرة تصل إلى 0.5 مللي ثانية ، وضمان أن يبدأ رد الفعل في حالة متجانسة .

2 - نظام الاختبار البصري : الحل بعد مختلطة في خزان المراقبة ، النظام البصري من خلال مصدر الضوء ( الضوء المرئي أو الأشعة فوق البنفسجية ) ، أحادي اللون ( اختيار الطول الموجي محددة ) و كاشف ( مثل الثنائي الضوئي أو اتفاقية مكافحة التصحر ) في الوقت الحقيقي تسجيل امتصاص مضان أو نثر إشارة التغييرات . وقت القرار يمكن أن تصل إلى ميكروثانية ( 10 μ s-10ms ) ، التقاط عابرة وسيطة أو رد فعل سريع حركية .

3 . time-resolved السيطرة : بعد توقف تدفق ردود الفعل ، من خلال خلط متزامن البصرية للكشف عن الزناد ، منحنى الإشارات المسجلة باستمرار مع الوقت ، وبالتالي فإن معدل التفاعل المستمر ، طاقة التنشيط وغيرها من المعلمات الحركية هي مشتقة .

ثانياً - تفاصيل الاستخدام

1 . إعداد العينة : المتفاعلة يجب أن تكون مستعدة في مناسبة العازلة قبل الترشيح من خلال غشاء الترشيح 0.22 ميكرون لتجنب انسداد فوهة . من أجل الحفاظ على نشاط البروتين أو انزيم عينة ، يجب أن يكون precooled إلى 4 ℃ . . . . . . .

2 . إعداد المعلمة

- سرعة التدفق و نسبة الخلط : ضبط سرعة الحقن ( على سبيل المثال ، 18.5 ميكرولتر / MS ) حسب سرعة رد الفعل ، وضمان خلط موحدة .

- اختيار الطول الموجي : تعيين الطول الموجي مميزة من خلال موحدات اللون ( على سبيل المثال ، ذروة امتصاص البروتين 280nm ) ، والحد الأدنى من خطوة يمكن أن تصل إلى 0.1nm .

- نافذة الوقت : تحديد فترة الاختبار ( على سبيل المثال من الألف إلى الثانية ) وفقا لطول وقت رد الفعل ، وتجنب اي مفتاح وسيطة إشارة .

3 - الحصول على البيانات : بعد اثار الاختلاط ، نظام تسجيل تلقائيا تغيير منحنى الامتصاص أو كثافة مضان مع الوقت . تكرار التجارب ( عادة أكثر من 3 مرات ) مطلوب لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء ، فارغة الضوابط ( مثل العازلة خط الأساس ) يتم خصمها .

4 - صيانة الأجهزة

- عملية التنظيف : بعد التجربة مباشرة ، شطف الأنابيب بالماء المتأين ، ثم إزالة الرواسب المتبقية من البروتين أو المعادن مع تركيز منخفض من حمض النيتريك أو هيدروكسيد الصوديوم الحل .

- المعايرة الدورية : التحقق من كثافة مصدر الضوء ، كاشف حساسية و خلط الوقت الاتساق ، لا سيما بعد فترة طويلة من الاستخدام تحتاج إلى إعادة معايرة تأخير الوقت .

- صيانة خزان العينة : يجب الحفاظ على خزان المراقبة ( مثل حجم 20 ميكرولتر ) نظيفاً لتجنب فقاعات الهواء أو الخدوش التي تؤثر على مسار الضوء .

5 - الاحتياطات

- تجانس الخلط : يمكن زيادة الضغط مسبقاً على عينة معقدة أو استخدام غرفة خلط الدوامة للحد من التدرجات الانتشار ] .

- التحكم في الحجم الميت : يجب أن تصمم الأنابيب لتقليل الحجم المتبقي ( عادة أقل من 10 ميكرولتر ) لمنع التلوث العابر .

- تأثير درجة الحرارة : نظام التحكم في درجة الحرارة يجب أن تحافظ على درجة حرارة ثابتة من رد فعل للدبابات ( على سبيل المثال ± 0.1 ℃ ) ، وتجنب موجة الحرارة تدخل في معدل التفاعل .