تركيز البروتين هو أداة رئيسية في الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية البحوث بسرعة تخصيب البروتين الهدف ، كفاءة الفصل يؤثر بشكل مباشر على دقة وموثوقية التجارب اللاحقة . ومع ذلك ، هناك العديد من العوامل التي قد تؤثر بشكل كبير على تركيز النتائج في الممارسة العملية .

السيطرة على البارامترات الفيزيائية الأساسية

1 . التوازن بين السرعة والوقت

سرعة دوران يحدد قوة الطرد المركزي ( RCF ) التي تؤثر بشكل مباشر على معدل الترسيب . على الرغم من أن سرعة دوران عالية جدا يمكن تسريع الانفصال ، فإنه يمكن أيضا أن تزيد من خطر الدوامة الحالية ، مما أدى إلى إعادة تعليق عجلت البروتينات . منخفضة جدا لا يمكن التغلب على تأثير الانتشار ، مما أدى إلى انخفاض معدل الاسترداد . سرعة الدوران المثالي يجب أن يكون جنبا إلى جنب مع تعديل الوزن الجزيئي للبروتين الهدف - انخفاض سرعة الدوران ( على سبيل المثال ، 3000 * ز ) ، وارتفاع سرعة الدوران ( تصل إلى 15000 * ز ) ينبغي أن تطبق على جزيء صغير من البروتين الطرد المركزي الوقت ينبغي أن تتبع مبدأ " التدرج " .

2 . اختيار الدوار وتحميل موازنة

هناك فرق كبير نسبيا في مجال قوة الطرد المركزي بين الزاوي الدوار الدوار ، الدوار الزاوي هو أكثر مناسبة لأنّ عال - كثافة التدرج الانفصال . عند تحميل العينة ، يجب أن تكون متوازنة بدقة ، ونوعية رديئة أكثر من 0.1g يمكن أن يسبب اهتزاز شديد ، وتدمير البروتين شكلت المنطقة . السرعة الزائدة يمكن أن يؤدي أيضا إلى الدوار المعادن التعب ، وتقصير عمر خدمة .

تعقيد نظام العينة

1 - عتبة تركيز البروتين الأولي

عندما يكون التركيز الأولي هو أقل من 0.5mg / ml ، احتمال الاصطدام بين جزيئات البروتين منخفضة جدا ، مما يجعل من الصعب تشكيل مرئية هطول . في هذه الحالة ، يمكن أن تكون preconcentration أو إضافة البروتين الناقل قبل الترشيح . وعلى العكس من ذلك ، فإن تركيز عال جدا ( > 50 مغ / مل ) يمكن أن يؤدي بسهولة إلى التجميع غير محددة ، مما يؤدي إلى إدراج الهيئات التي يصعب حلها .

2 - تكوين التوافق العازلة

عالية من الملح العازلة ( مثل برنامج تلفزيوني ) يمكن ضغط طبقة مزدوجة الكهربائية ، وتعزيز دمج البروتين . نظام يحتوي على المنظفات ( تريتون x-100 ) يجب أن تختار بعناية الاحتفاظ الوزن الجزيئي غشاء الترشيح الفائق . بعض الإضافات مثل شماعة يمكن أن تعزز التفاعل مسعور ، وتحسين كفاءة التقاط البروتين مع انخفاض وفرة ، ولكن الإفراط في المنافسة ملزمة المواقع .

3 . النجاسة تأثير التدخل

الحمض النووي من التلوث هو المشكلة الأكثر شيوعا ، لزجة الملمس يمنع تدفق البروتين . الحمض النووي الجينوم يمكن هضمها عن طريق إضافة الحمض النووي في الانحلال الحراري السائل أو انتقائية هطول طريقة لإزالة الشوائب من السكريات . الدهون هي المغلفة مع البروتين على شكل مجمعات التي تحتاج إلى المعالجة من خلال استخراج المذيبات العضوية .

مراقبة دقيقة من الظروف البيئية

1 - الدور المزدوج لدرجات الحرارة

انخفاض درجة الحرارة ( 4 ℃ ) يمكن أن تمنع بشكل فعال نشاط الأنزيم البروتيني ، ومنع تدهور البروتين الهدف ، ولا سيما في بدائيات التعبير نظام lysates العلاج . ومع ذلك ، فإن حالة التبريد يمكن أن تزيد من لزوجة الحل ، والحد من كفاءة النقل الجماعي . thermosensitive البروتين يجب أن تعمل في حمام الثلج و يوضع على الجليد مباشرة بعد الطرد المركزي .

2 - فقدان الرطوبة وتقلب

فترة طويلة من فتح الطرد المركزي يمكن أن يؤدي إلى تبخر المذيبات ، تغيير البروتين التشكل . نوصي باستخدام أنبوب الطرد المركزي الخاص مع ختم غطاء ، والحفاظ على التوسع في الفضاء . عن المذيبات العضوية المتطايرة ، يمكن أن تكون معبأة مع غاز خامل لعزل الهواء من الاتصال .

ضرورة توحيد إجراءات التشغيل

1 - توحيد أساليب أخذ العينات

عينة تضاف ببطء على طول جدار الأنبوب لتجنب فقاعات الهواء ، و اضطراب حاد في مستوى السائل قد كسر طبقة البروتين التي شكلت حديثا . بعد التبطين ، يميل ثقب ينبغي أن تستخدم للحد من الاضطرابات المادية من الرواسب .

2 - معايرة المعدات وصيانتها

تسارع منحنى من أجهزة الطرد المركزي يتم فحصها بشكل دوري و الثانوية تعليق قد تحدث في مرحلة تباطؤ الشيخوخة المعدات . الدوار يجب تنظيفها وتطهيرها في الوقت المناسب بعد استخدام البروتين المتبقية قد تصبح مصدر التلوث في التجربة القادمة .

نجاح تركيز البروتين يعتمد على دقة السيطرة على المتغيرات المتعددة الأبعاد . من أجل الحصول على الهدف من البروتين المنتج مع ارتفاع العائد و نقاء عالية ، والباحثين بحاجة إلى إنشاء ملف التشغيل على أساس خصائص محددة من البروتين ، والبحث عن أفضل مزيج من المعلمات قبل التجربة ، وتنفيذ عملية موحدة بدقة .