تحسين الأهداف الأساسية

　　متعدد القنوات ببتيد صك الاصطناعيةالمزايا الرئيسية هي " موازية التوليف ، دفعة الانتاج " ، وتحسين الكفاءة ينبغي أن تركز على " تحسين معدل نجاح قناة واحدة التوليف ، وتقصير فترة التزامن متعدد القنوات ، والحد من فقدان رد فعل الجانب " ، في إطار فرضية ضمان نقاء ببتيد ( عادة أكثر من 95 في المائة ) ، وتحقيق المزيد من جودة عالية ببتيد التوليف في وحدة الزمن ، وفي الوقت نفسه السيطرة على تكلفة الكاشف الاستهلاك .

التحسين من المعلمات التوليف : تحسين كفاءة التفاعل مع دقة التنظيم

1 - تحسين معايير تفعيل الأحماض الأمينية

نسبة تركيز المنشط : تعديل نظام التنشيط حسب نوع من الأحماض الأمينية ( مسعور / ماء ، α - اللولب / β - أضعاف الميل ) ، على سبيل المثال ، عند تجميع الأحماض الأمينية غير قابلة للذوبان ( مثل حمض أميني أساسي ، لوسين ) ، hbtu / hobt / دييا نظام التنشيط المستخدمة . الأحماض الأمينية التقليدية يمكن أن تستخدم في مدينة دبي للإنترنت / هوبت النظام ، نسبة المولي 1.0 : 1.0 لتلبية الطلب ، والحد من النفايات كاشف .

التحكم في وقت التنشيط : تفعيل الوقت من الأحماض الأمينية التقليدية 3-5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، والأحماض الأمينية ( على سبيل المثال ، آيسولوسين ، فينيلألانين ) التي تحتوي على β - متفرع أو العطرية السلاسل الجانبية يجب أن تمتد إلى 5-8 دقائق ، وبالتالي تجنب انخفاض كفاءة التكثيف بسبب عدم تفعيل . بعد التنشيط ، تغذية يجب أن تكتمل في غضون 30 دقيقة لمنع تدهور تفعيل وسيطة .

2 - التحسين من المعلمات التكثيف

درجة حرارة التفاعل و الوقت : درجة حرارة الغرفة ( 25 ± 2 ℃ ) كان رد الفعل المستخدمة في توليف ببتيد التقليدية ، خطوة واحدة التكثيف الوقت 20-30 دقيقة . ببتيد وجود الفراغية عائق ( على سبيل المثال ، سلسلة تحتوي على عدد وافر من البرولين ، ثالثي بوتيل مجموعات واقية ) يمكن أن تزيد من درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية ، التكثيف الوقت يمكن تمديدها إلى 40-60 دقيقة ، أو استخدام درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ، ثم 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ) طريقة لتحسين معدل التحويل .

اختيار واستخدام المذيبات : 10 ٪ - 20 ٪ DMSO يمكن أن تضاف إلى تعزيز الذوبان في توليف ماء ببتيد على أساس DMF . عندما يتم تصنيعه في وقت واحد متعدد القنوات ، وكمية من المذيبات في كل قناة يجب أن تسيطر عليها بدقة من 5 إلى 8 مرات من حجم الراتنج ، وبالتالي ضمان ما يكفي من تورم من الراتنج ، موحدة الاتصال بين الكاشف والراتنج ، وتجنب رد فعل جزئي غير مكتملة بسبب عدم كفاية المذيبات .

3 . الأمثل حماية المعلمات

تركيز و وقت deprotecting كاشف : 20 ٪ تأكسد / DMF الحل كان يستخدم deprotecting كاشف . من أجل حماية الأحماض الأمينية التي تحتوي على مجموعات مثل fmoc-arg ( PBF ) ، fmoc-asn ( TRT ) ، تركيز البيبيريدين يمكن أن تثار إلى 25 ٪ ، أو يمكن أن تكون محمية من قبل اثنين من الخطوات ( أول 5 دقائق ، ثم إضافة كاشف جديد لمدة 10 دقائق بعد أن تخلى عن الحل ) ، وذلك لضمان حماية قيم أكثر من 99 في المائة ، وتجنب تأثير بقايا مجموعة واقية بعد التكثيف .

تحسين عملية الغسيل : غسل DMF 3-5 مرات بعد إزالة الحماية ، حجم الغسيل هو 6 مرات حجم الراتنج ، وغسل الوقت 30 ثانية / مرة ، وفي الوقت نفسه فتح القنوات متزامن مع التحريك ، وتحسين كفاءة الغسيل ، والحد من بقايا الببريدين الناجمة عن الأحماض الأمينية راسمي .

متعدد القنوات التعاونية الأمثل : تجنب الاختناقات التزامن

قناة تحميل موازنة تصميم

وفقا لطول وصعوبة توزيع قناة ببتيد تسلسل ، تسلسل قصيرة ( ≤ 10 الأحماض الأمينية ) و تسلسل طويل ( ≥ 20 الأحماض الأمينية ) ، من السهل تجميع تسلسل وصعوبة تجميع تسلسل عبر توزيعها على قنوات مختلفة ، وبالتالي تجنب تأخير دورة التوليف كله بسبب طول وقت رد الفعل من قناة واحدة . على سبيل المثال ، 4-channel التوليف ، 2-channel توليف 15 الببتيدات ( التقليدية صعوبة ) ، 1-channel توليف 25 الببتيدات ( صعوبة عالية ) ، 1-channel توليف 8-peptides ( من السهل تجميع ) ، من خلال ترشيد تخصيص القنوات تقريبا تزامن الانتهاء .

2 . الكواشف العرض والتوزيع الأمثل

قبل خلط الكاشف إعداد مقدما : عندما يتم تجميع ببتيد من نفس النوع في دفعة واحدة ، قبل خلط المنشط الكاشف و حل الأحماض الأمينية حسب عدد من القنوات مقدما ، بعد فصل وتعبئتها من قبل كاشف زجاجة خاصة ، كل قناة يتم إدخالها في المقابل ، وبالتالي تجنب إضاعة الوقت في إعداد قناة واحدة واحدة ، وفي الوقت نفسه ضمان الاتساق في تركيز كل قناة الكاشف .

فحص الأنابيب والصمامات : التحقق من ما إذا كان أو لم يكن متعدد القنوات كاشف توزيع الأنابيب على نحو سلس ، صمام الملف اللولبي التبديل استجابة حساسة ، لضمان أن كل قناة كاشف تغذية كمية الخطأ ≤ ± 2 ٪ ؛ من السهل أن تبلور الكواشف ( مثل hbtu ) ، يجب أن تكون ملفوفة في قارورة العزل ( درجة الحرارة 25-30 ℃ ) لمنع تبلور انسداد خط أنابيب يؤدي إلى تفاوت التغذية .

3 - التدرج في درجة الحرارة و التحكم التزامن

التدرج في درجة الحرارة يمكن أن تستخدم استراتيجية لتحسين درجة الحرارة ( أقل من 40 ℃ ) من بطء رد فعل قناة واحدة ، وفي الوقت نفسه ، وضع " تأخر قناة تغذية تفضيلية " يمكن أن تكون مجموعة من برامج التشغيل ، والتي يمكن أن تقلل من 1-2 دقيقة عن تأخر قناة في مرحلة مبكرة من deprotection والغسيل خطوة ، وبالتالي ضمان الانتهاء من التكثيف رد فعل في وقت واحد ، والحد من وقت الانتظار .

تحسين إدارة المعدات والكواشف

1 . معدات المعالجة والصيانة

قبل تركيب معدات التسخين وظيفة فتح ، رد فعل درجة حرارة الغرفة استقرت في مجموعة قيمة ( ± 0.5 ℃ ) ، وفي الوقت نفسه ، متعدد القنوات التحريك المروحة معايرة لضمان سرعة التحريك في كل قناة هي نفسها ( خطأ أقل من 5 دورة في الدقيقة ) ، وبالتالي تجنب الفرق المحلية كفاءة التفاعل بسبب تفاوت التحريك .

تنظيف خط أنابيب توزيع الكواشف و رد فعل غلاية بانتظام ( 50 دفعات في التوليف ) ، شطف مع DMF والميثانول بالتناوب ثلاث مرات ، وإزالة بقايا الأحماض الأمينية والكواشف هطول ، ومنع انسداد خط أنابيب أو عبر التلوث ، وضمان كفاءة النقل من الكواشف .

2 - نوعية الكواشف وإدارة التخزين

نقاء عالية الكواشف ( نقاء الأحماض الأمينية أكثر من أو يساوي 99 ٪ ، نقاء تفعيل الكواشف أكثر من أو يساوي 99 ٪ ) ، وتجنب زيادة ردود الفعل السلبية الناجمة عن الشوائب . تخزين الكواشف يجب أن تصنف على النحو المطلوب : الأحماض الأمينية الصلبة مختومة - 20 ℃ cryopreserved السائل الكواشف ( مثل تأكسد ، DMF ) في درجة حرارة الغرفة لتجنب الضوء ، و 3 أشهر بعد فتح .

قبل استخدام كاشف الدولة : DMF محتوى الماء أقل من أو يساوي 0.05 في المائة ( يمكن الكشف عنها بواسطة طريقة كارل فيشر ) ، وتفعيل كاشف لا التكتل ، تلون ، إذا كان كاشف غير مؤهل ، تحتاج إلى استبداله في الوقت المناسب ، لتجنب المشاكل الناجمة عن انخفاض كفاءة كاشف الاصطناعية أو الفشل .

استراتيجية خاصة لتحسين كفاءة من الصعب تجميع تسلسل

مسعور ببتيد : استخدام " عكس نظام المذيبات " ( DMF / ثنائي كلورو ميثان = 7 : 3 ) زيادة ذوبان ببتيد ، إضافة 0.1 في المائة trifluoroethanol كما cosolvent ; في عملية التكثيف ، مزدوج " تفعيل " الطريقة المستخدمة ( hbtu أولا تفعيلها ، ثم كمية صغيرة من pybop أضيفت إلى تعزيز التفاعل ) ، خطوة واحدة التكثيف الوقت لفترات طويلة إلى 60 دقيقة .

تحتوي على عدد وافر من تكرار تسلسل الأحماض الأمينية ، مثل بولي بولي الغليسين ، علاء ، إضافة " قبل غسل " خطوة ( مرتين مع DCM غسل الراتنج ) قبل تكرار الأحماض الأمينية تغذية ، والحد من بقايا واقية على سطح الراتنج قاعدة شظايا . وفي الوقت نفسه ، التكثيف درجة الحرارة انخفضت إلى 20 ℃ و راسمي الأحماض الأمينية بسبب ارتفاع درجة الحرارة هو تجنب .

cyclopeptide التوليف : ارتفاع تركيز نظام رد الفعل ( الراتنج تركيز 0.1g / ml ) اعتمد في cyclization خطوة ، و كمية الحفاز هو إضافة ( 0.1eq ) و cyclopeptide الكاشف أضيفت إلى cyclization طريقة " ببطء بالتنقيط " الوقت الذي يقطر من 10 إلى 15 دقيقة ، مما يحسن cyclization الكفاءة ويقلل من بقايا الخطية الببتيد .

التحقق من ضبط تأثير الأمثل

بعد كل التحسين ، ونحن بحاجة إلى التحقق من صحة النتائج من خلال ثلاثة مؤشرات : ① كفاءة التوليف ( عدد المؤهلين ببتيد دفعات في وحدة الزمن ) ؛ ② نقاء ببتيد ( نقاء الهدف ≥ 95 ٪ من هبلك ) ؛ ③ كاشف كاشف الاستهلاك لكل 1 ملمول ببتيد التوليف . إذا كان مؤشر معين لا تصل إلى مستوى ، تحتاج إلى ضبط المعلمة : إذا نقاء ليست كافية ، deprotection والتكثيف الوقت الأمثل ، إذا كانت الكفاءة ليست مرتفعة ، قناة توزيع الحمولة أو حالة تشغيل المعدات يتم التحقق للتأكد من أن المشروع الأمثل هو الهبوط بشكل فعال .