في آب / أغسطس 2024 ، psa-16 ساعد العلماء في المختبر الوطني لعلم الفيروسات في جامعة ووهان في نشر ورقة بعنوان " في attachment glycoprotein nanoparticle elicits broadlyneutralizing antibodies و protects againstlethal نيباه فيروس المعلومات " في مجلة نيتشر في آب / أغسطس 2024 . في هذه الدراسة ، رواية آمنة وفعالة التجميع الذاتي البروتين جسيمات متناهية الصغر لقاح فيروس نيبا ز البروتين وضعت بنجاح ، والتي يمكن أن تحفز مجموعة واسعة من الأجسام المضادة تحييد تثبيط عدوى فيروس نيبا ، وحماية الهامستر من فيروس نيبا العدوى .

Zhou، D. et al.

npj Vaccines 9, 158 (2024).

https://doi.org/10.1038/s41541-024-00954-5

الاستقرار الحراري للبروتين يشير إلى تشوه قدرة polypeptides تحت تأثير درجة الحرارة ، والتي يمكن أن تنعكس بشكل رئيسي في الخصائص الكيميائية والمساحة التشكل من polypeptides تحت درجة حرارة مختلفة . الاستقرار الحراري للبروتين يتأثر بعوامل خارجية مثل درجة حرارة مختلفة ، ودرجة الحموضة ، القوة الأيونية ، وهلم جرا .

درجة حرارة البروتين لمسخ هو مفهوم هام في علم الأحياء لدراسة الاستقرار الحراري للبروتين ، الذي يشير إلى درجة الحرارة نقطة بنية البروتين يتغير عندما يتعرض للحرارة في درجة حرارة معينة . الاستقرار الحراري للبروتين هو عادة عن طريق درجة حرارة الوسط ( TM ) من التشويه والتحريف الحراري ، أي درجة الحرارة 50 ٪ من البروتين للطي .

01 مقدمة

فيروس نيبا ( NIV ) هو سلبي واحد الذين تقطعت بهم السبل فيروس الحمض النووي الريبي المعزولة من ماليزيا وسنغافورة في الفترة من 1998 إلى 1999 . نيف العدوى يمكن أن يؤدي إلى التهاب الدماغ الحاد وأمراض الجهاز التنفسي ، مع معدل وفيات يصل إلى 75 ٪ . وبالإضافة إلى ذلك ، على المدى الطويل من الأمراض العصبية و نيفادا العدوى المتكررة كما لوحظ بين الناجين . في الوقت الحاضر ، لا يوجد لقاح أو علاج معتمد للاستخدام البشري . نيف يشفر بروتين سكري ( ز ) على سطح الفيروس ، المسؤولة عن الاعتراف المستقبلات ملزمة ، ملزمة المستقبلات ، ز البروتين يخضع لسلسلة من التغيرات المورفولوجية ، لإكمال غشاء الخلية المستهدفة الانصهار ، وبالتالي مساعدة الفيروس في الخلايا المستهدفة و تسبب العدوى . وبالإضافة إلى ذلك ، العديد من تحييد الأجسام المضادة الواقية تستهدف أساسا ز البروتين ، مما يشير إلى أن فيروس ز البروتين هو مفتاح تطوير لقاح مستضد . في الآونة الأخيرة ، العديد من منصات اللقاحات ضد عدوى فيروس الهربس البسيط ( NIV ) تم تطويرها ، بما في ذلك mRNAs、 مثل الجسيمات الفيروسية ( VLP ) ، ناقلات لقاح الحمض النووي لقاح فيروس ، ولكن لم يتم تقييمها من قبل niv-infection الذاتي تجميعها النانوية .

ملخص

في هذه الورقة ، فإننا تصميم نوع من التجميع الذاتي النانوية على أساس فيريتين ، والتي تظهر niv g-ferritin على السطح . NiV G-ferritin）， وعلاوة على ذلك ، فإن الاستجابات المناعية الناجمة عن ذوبان niv g-head المجال ( niv-sg ) أو niv-g-ferritin تم تقييمها .

النتائج

الاستقرار الحراري niv g-feritin و niv sg تم تحليلها من قبل فرق المسح مضان ( DSF ) من حيث المبدأ مع psa-16 ، محلل البروتين الاستقرار وضعت بشكل مستقل من قبل بكين أفضل التكنولوجيا المحدودة .

طريقة

الاستقرار الحراري للبروتين الهدف يحدده مسعر المسح التبايني ( DSF ) . العينة كانت مخففة إلى 0.5mg / ml و 20 ميكرولتر المخفف في أنبوب الكوارتز .

كثافة مضان ( و ) من 330nm و 350nm من البروتين المستهدف في 280nm الأشعة فوق البنفسجية تم قياسها في الوقت الحقيقي باستخدام درجة الحرارة الخطية المسح من 23 إلى 97 درجة مئوية في 1 درجة مئوية / دقيقة .

متوسط درجة حرارة التحول الحراري ( TM ) حسبت على أساس المنحدر من f350nm / f330nm منحنى . يتم قياس كل عينة أربع مرات بالتوازي .

الخطوات التجريبية

1 ) عند إجراء اختبار الاستقرار الحراري ، أولاً تحديد درجة الحرارة الأولية . درجة الحرارة الأولية من واجهة المستخدم الرسومية هو 15 ℃ ويمكن تعديلها من خلال " + " - " زر .

2 ) بعد تحديد درجة الحرارة الأولية ، يمكن تعيين درجة الحرارة النهائية التالية . درجة الحرارة النهائية تصل إلى 110 ℃ ويمكن تعديلها من خلال " + " - " زر .

3 ) بعد تحديد درجة الحرارة الأولية والنهائية درجة الحرارة ، ثم تعيين معدل التسخين . معدل التسخين يمكن تعديلها في نطاق 0.1-15 ℃ / دقيقة .

4 ) يمكن اختيار حساسية الكشف وفقا لاختلاف تركيز العينة . حساسية عالية للكشف عن 0.05-1 مغ / مل من العينات ، حساسية متوسطة للكشف عن 1-10 مغ / مل من العينات ، وانخفاض حساسية الكشف عن 10 مغ / مل من العينات .

5 ) بعد تعيين المعلمات أعلاه ، يمكنك النقر على اختيار العينة التي تحتاج إلى اختبار ، ويمكن إدخال اسم العينة . العينة المختارة سيتم عرضها في المربع الأزرق .

6 ) بعد الانتهاء من إعداد المعلمة ، يمكنك النقر على زر " قبل المسح الضوئي " . الصك سوف تفحص عينة لمعرفة ما إذا كانت قيمة مضان يتوافق مع متطلبات الاختبار .

7 ) بعد ما قبل المسح الضوئي ، يمكنك النقر على زر " بدء التجربة " لإجراء اختبار الاستقرار الحراري .

النتائج التجريبية .

8 ) بعد الانتهاء من الاختبار ، سيقوم البرنامج تلقائيا تحليل البيانات ودخول واجهة عرض النتائج .

9 ) في واجهة عرض النتائج ، سيتم عرض منحنى لمسخ كل عينة ، المشتقة الأولى من منحنى لمسخ ، TM قيمة لمسخ درجة الحرارة وقيمة تون لمسخ درجة الحرارة الأولية .

10 ) إذا كان البرنامج لا يمكن التعرف تلقائيا على ذروة المشتقة الأولى ، ويمكن أيضا أن يكون مؤشرا يدويا عن طريق إضافة زر " إضافة علامة " .

11 ) إذا كنت ترغب في تصدير البيانات الخام أو الصور ، يمكنك تحقيق ذلك من خلال " تصدير البيانات " و " تصدير الصور " أزرار .

كما أعرب عن امتنانه بكين أفضل التكنولوجيا المحدودة ، التي توفر الاستقرار البروتين محلل psa-16 وضعت بشكل مستقل ، والحصول على البيانات من الاستقرار الحراري تحليل البروتين عينات .

المسح الضوئي مضان تفاضلي ( indsf الذاتية )

إن endogenesis التفاضلية المسح الضوئي مضان indsf استنادا إلى خصائص محددة من الأحماض الأمينية في البروتين . كثافة مضان من هذه الأحماض الأمينية هو وثيق الصلة المكروية ، وبالتالي ، عندما بنية البروتين التغييرات ، مضان إشارة من هذه الأحماض الأمينية سوف تتغير أيضا . لا حاجة لإضافة صبغة الفلورسنت إضافية إلى نظام الكشف ، وذلك باستخدام مبدأ الانارة الذاتية من الأحماض الأمينية العطرية في البروتين . لا تحتاج إلى أي علامات إضافية أو خطوات ثابتة لتجنب إدخال نتائج غير مؤكدة .

وقد وجد أن أقصى قدر من الأطياف الانبعاثات الذاتية مضان من الأحماض الأمينية العطرية ( AAA ) متحمس في مختلف microenvironments القطبية ( على سبيل المثال ، مسعور أو ماء ) . مضان الذاتية في البروتين يأتي أساسا من الأحماض الأمينية العطرية مثل تريبتوفان ( الحزب ) ، فينيلألانين ( PHE ) التيروزين ( Tyr ) . عندما يكون داخل البروتين ، الضوء المنبعث هو أساسا في 330 باند ، وعندما البروتين هو مطوية ، يتعرض المذيبات ، الضوء المنبعث من 330 الطول الموجي الأحمر إلى 350 . حتى TM قيمة البروتين يمكن قياسها عن طريق الكشف عن نسبة 330 / 350 280 الإثارة .

على سبيل المثال ، في النواة المكروية من البروتين مسعور ، أقصى قدر من الانبعاثات الذاتية مضان الطول الموجي حوالي 330 نانومتر ، في حين أن أقصى قدر من الانبعاثات الذاتية مضان الطول الموجي حوالي 350 نانومتر في ماء القطبية المكروية . الحرارية أو الكيميائية لمسخ لمسخ البروتين عادة ما يؤدي إلى تغيير في قطبية المكروية حول تريبتوفان المخلفات ، مما يؤدي إلى تعريض تريبتوفان عادة جزءا لا يتجزأ من البروتين مسعور النواة تدريجيا إلى ماء البيئة ، مما يؤدي إلى أقصى انبعاث مضان الذاتية الطول الموجي التحول الأحمر ( الأحمر التحول ) ، وهذا هو ، إلى أكبر منطقة الطول الموجي .

الخصائص : الداخلية التفاضلية المسح الضوئي مضان DSF لا تحتاج إلى عينة معقدة أو إجراءات وضع العلامات ، تجربة بسيطة نسبيا . ولكن ليس كل البروتينات تحتوي على ما يكفي من المجموعات الفلورية ، ويمكن أن تتأثر مجموعات أخرى .

psa-16 محلل استقرار البروتين

baisite بكين للعلوم والتكنولوجيا المحدودة ، في عام 2023 ، أطلقت أول محلية الصنع psa-16 استقرار البروتين محلل .

أداء المعلمات من psa-16 تصل إلى مستوى المعدات المستوردة ، ولكن الأسعار هي أقل بكثير من المنتجات المستوردة ، مما يعوض عن النقص في مجال البحوث وتحليل الاستقرار البروتين المحلية معدات مستقلة في الوقت الحاضر .

المعالم الرئيسية ] : TM ، سم ، Δ ز .

★ تدفق العينة : 16 ؛

★ حجم العينة : ≤ 20 ش .

★ تركيز مجموعة : 0.01-200 ملغ / مل ؛

★ نطاق التحكم في درجة الحرارة : 15-110 درجة ؛

★ سرعة درجة الحرارة : 0.1-15 درجة / دقيقة ؛

★ TM التكرار : السيرة الذاتية أقل من 1 ٪ ؛

★ المواد الاستهلاكية المعلمات : لمرة واحدة ، لا تحتاج إلى تنظيف .

★ ثمانية الصف تصميم مناسب متعدد القنوات الماصة .

متعددة الوظائف محلل البروتين الاستقراراختراع يمكن تطبيقها على نطاق واسع في مجالات مثل استقرار البروتين البحث الأمثل هندسة البروتين جزيء المخدرات ( الأجسام المضادة ) ، وفحص المخدرات جزيء صغير من البروتين الهدف من الأمراض ، وتحديد قوة ملزمة ، وما إلى ذلك ، لديها مزايا سرعة ودقة تدفق عالية ، الخ . مضان خصائص التربتوفان / التيروزين في البروتين ترتبط ارتباطا وثيقا بالبيئة . ولذلك ، فإن الاستقرار الكيميائية والحرارية من البروتين يمكن قياسها من خلال الكشف عن مضان تغيير التربتوفان / التيروزين في البروتين أثناء التسخين أو إضافة Denaturation . . . . . . .

إن psa-16 مزدوجة الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية للكشف عن مضان التيروزين التربتوفان و تغيير في عملية طي البروتين يمكن قياسها بدقة . هذه الطريقة يمكن استخدامها على نطاق واسع في دراسة استقرار غشاء البروتين وارتفاع تركيز الأجسام المضادة في المنظفات البيئة . وبالإضافة إلى ذلك ، psa-16 عالية جدا سرعة الحصول على البيانات ، وبالتالي توفير بيانات فائقة الدقة . وفي الوقت نفسه ، psa-16 يمكن تحديد ما يصل إلى 16 عينات في وقت واحد ، مع تدفق عالية . كل عينة يحتاج فقط 15 ش ، وكمية صغيرة من العينة ، لذلك هو مناسبة لأنّ عال تدفّق غربلة . بسا - 16 عملية بسيطة ، لا تحتاج إلى تنظيف بعد الاستخدام ، تقريبا أي تكاليف الصيانة .

psa-16 متعددة الوظائف محلل البروتين الاستقرار ينطبق على العديد من المجالات ، مثل النباتات ، علم الأحياء ، علم الحيوان ، الطب الحيواني ، علم الأحياء الدقيقة ، التخمير الصناعية ، والعلوم البيئية ، مؤسسة الزراعة ، هندسة البروتين ، وهلم جرا . البروتينات هي الجزيئات الحيوية التي تحدد في نهاية المطاف وظيفة ، والتي تشارك وتؤثر على كامل عملية الحياة . العديد من الاتجاهات الحديثة في علم الأحياء الجزيئي ، العلوم البيئية ، علم الحركة ، مؤسسة الزراعة ، وما إلى ذلك تشارك في البحث عن وظيفة البروتين ، فضلا عن مجموعة متنوعة من الطرق الفيزيائية والكيميائية الحيوية في تحليل المصب ، وتوفير عينات البروتين مستقرة هو شرط مسبق لجميع البحوث البروتين . ولذلك ، متعددة الوظائف نظام تحليل الاستقرار البروتين له أهمية أساسية في مختلف التخصصات .

1 - الفرز الفائق الإنتاجية من الأجسام المضادة أو اللقاحات أو الإنزيمات

2 . الاستقرار الكيميائية ، على المدى الطويل الاستقرار تقييم الأجسام المضادة أو اللقاحات ، انزيم إعداد دراسة استقرار الحرارة ، الخ .

3 - دراسة عن التشابه الحيوي

4 - دراسة الأجسام المضادة إلى جانب المخدرات ( ADC )

5 . البحث عن decolding خصائص متعددة المجالات .

6 - دراسة عن التدهور القسري للظروف الفيزيائية والكيميائية

7 - البحث عن البروتين والإعادة الى الوضع السابق ( والإعادة الى الوضع السابق والإعادة الى الوضع السابق القدرة الحركية ، الخ . )

8 . غشاء البروتين المنظفات ، غشاء البروتين ملزمة يجند الفحص .

9 - الهدف القائم على تدفق عالية الجزيئية الصغيرة فحص المخدرات

10 - تحسين ظروف تنقية البروتين بسرعة .